Standard AMES teszt
Az AMES teszt egy széles körben alkalmazott vizsgálat a mutagén potenciál detektálására kémiai vegyületekben, beleértve az N - nitrozaminokat is. Annak ellenére, hogy szignifikáns a toxikológiai szűrésben, a standard AMES -tesztnek számos korlátozása van, különösen a komplex metabolikus aktiválást igénylő vegyületek értékelésekor.
A standard AMES teszt korlátozásai
Noha az Ames -teszt továbbra is sarokköv a mutagenitási tesztelésben, bizonyos korlátozásokkal rendelkezik:
- Korlátozott anyagcsere -aktiválás:
A standard AMES -teszt általában patkánymáj S9 -et használ, amelyben nincs bizonyos emberi - releváns citokróm P450 (CYP) enzimek. Ez a prokarcinogének (például néhány n - nitrozamin) vagy a nem - humán veszélyek túllépésének alulaktiválásához vezethet. Példa: A patkány S9 rosszul metabolizálja az N - nitrozodietil -amin (NDEA) -ot az emberi enzimekhez képest, téves negatívokat kockáztatva.
- Korlátozott mutációs spektrum detektálás:
A standard törzsek (például TA98, TA100) csak a specifikus mutációtípusokat (Frameshifts, Base - pár helyettesítést), a hiányzó klastogének vagy az epigenetikus karcinogének detektálnak.
- Túl - Biztonság a baktériumrendszerekre:
Mivel a teszt Salmonella typhimuriumot használ, nem veszi figyelembe az emlős sejtekben jelenlévő DNS -javítási mechanizmusokat, potenciálisan hiányoznak néhány mutagén hatással.
- Hamis pozitív és negatívok:
Egyes nem - mutagén vegyületek pozitív eredményeket eredményezhetnek a baktériumok stresszválaszai miatt, míg néhány komplex anyagcsere -aktiválást igénylő mutagén észrevétlenül lehet.
A továbbfejlesztett Ames teszt
Az EMA legfrissebb kiadása Q & As útmutatása kimondja, hogy egyes N - nitrozaminok (például NDMA) alacsony érzékenysége miatt a standard AMES -teszt körülményei mellett az FDA Nemzeti Toxikológiai Kutatási Központ (NCTR) által nyújtott továbbfejlesztett AMES -teszt feltételei. Az FDA arra a következtetésre jutott, hogy az AMES -teszthez használt standard módszerek nem elegendőek az N - nitrozaminok mutagén potenciáljának jellemzéséhez, és egyes esetekben negatív eredményeket hozhatnak az ismert mutagén nitrozaminok számára. Válaszul az FDA Nemzeti Toxikológiai Kutatási Központja különböző feltételeket tesztelt a továbbfejlesztett AMES -teszt kidolgozása érdekében, amelynek célja az N - nitrozamin -szennyeződések mutagén potenciáljának megbízhatóbb értékelése.
A következő továbbfejlesztett Ames teszt (EAT) feltételeket az FDA biztosítja
|
Tesztfeszültség |
Tartalmazza a Salmonella Typhimurium TA98, TA100. TA1535, TA1537 és Escherichia coli WP2 UVRA (PKM101) teszt törzs |
|
Tesztelési módszer és a szigetelési idő előtti idő |
Pre - A szigetelés és a nem - síkágyas módszereket kell alkalmazni, az ajánlott pre - szigetelési idő 30 perc. |
|
S9 típus és koncentráció |
A továbbfejlesztett AMES -tesztet 30% Patkánymáj S9 -ben és 30% -ban kell elvégezniHörcsög máj S9- Patkány- és hörcsög desmoszomális felülúszókat (S9S) kell elkészíteni a rágcsáló májbólcitokróm P450 enzim- Indukáló anyagok (például a fenobarbitális és a β - naftoflavon kombinációja). |
|
Negatív (oldószer/segédanyag) kontroll |
A felhasznált oldószereknek kompatibilisnek kell lenniük az AMES teszttelOECD 471iránymutatások. A rendelkezésre álló oldószerek tartalmazzák, de nem korlátozódnak a következőkre: (1) víz; (2) Szerves oldószerek, például acetonitril, metanol és dimetil -szulfoxid (DMSO). Szerves oldószerek használatakor a Pre - tartóelemben a lehető legalacsonyabb térfogatot kell használni, és be kell mutatni, hogy a használt szerves oldószer mennyisége nem zavarja az N - nitrozaminok metabolikus aktiválását. |
|
Pozitív irányítás |
Az OECD 471 iránymutatásai szerint a törzs - A specifikus pozitív kontrollokat egyszerre kell elvégezni. Az S9 jelenlétében a mutagénnek ismert két N - nitrozaminot is pozitív kontrollként kell használni. Rendelkezésre álló n - nitrozamin pozitív kontrollok: NDMA, 1 - ciklopentil - 4 - nitrosopiperazin ndsris。 |
|
Az Ames meghatározására vonatkozó összes többi ajánlásnak követnie kell az OECD 471 iránymutatást |
|
A hörcsög máj S9 frakció egyedi előnye
A hörcsög máj S9 frakció különösen értékes az Ames -tesztelés során, mivel kiváló képessége van bizonyos N - nitrozaminok aktiválására, mint a patkánymáj S9 -hez képest. Szorosabb anyagcsere -profilja van az emberi máj enzimekhez, ezáltal relevánsabbá téve az emberi kockázatértékelés szempontjából. Ezenkívül a hörcsög máj S9 magasabb szintű specifikus citokróm P450 enzimeket tartalmaz, amelyek kulcsfontosságúak a mutagének bioaktivációja szempontjából. Ez jobb érzékenységet és csökkentett hamis - negatív sebességeket eredményez, lehetővé téve a mutagének jobb kimutatását, amelyek egyébként csak a patkány máj S9 -rel vannak észrevételtek.
Következtetés
Noha a standard AMES -teszt továbbra is alapvető eszköz a mutagenitás értékeléséhez, korlátozásai javításokat igényelnek a jobb pontosság érdekében. A továbbfejlesztett AMES -teszt, különösen a hörcsög -máj S9 frakció bevonásával, jelentősen javítja a komplex mutagének, például az N - nitrozaminok kimutatását, áthidalva a baktériumok és az emlősök anyagcseréje közötti rést. Ez az előrelépés megbízhatóbb módszert kínál a potenciális emberi karcinogének értékelésére, és támogatja a jobb szabályozási döntést.
Kulcsszavak: N - nitrozaminok, NDSRIS, OECD 471, továbbfejlesztett Ames -teszt, hörcsög máj S9, citokróm P450 enzimek, mutációs teszt
Idő: 2025 - 03 - 12 09:22:09