Ստանդարտ Ames թեստ
AMES թեստը լայնորեն օգտագործված փորձ է քիմիական միացություններում մուտագենային ներուժը հայտնաբերելու համար, ներառյալ N - Nitrosamines: Չնայած տոքսիկոլոգիական ցուցադրումին իր նշանակությանը, ստանդարտ AMES թեստը ունի մի քանի սահմանափակումներ, մասնավորապես, բարդ նյութափոխանակության ակտիվացում պահանջող միացությունները գնահատելու ժամանակ:
Ստանդարտ AMES թեստի սահմանափակումները
Մինչ Ames- ի թեստը մնում է հիմնաքար, մուտագենության փորձարկումներում, այն ունի որոշակի սահմանափակումներ.
- Սահմանափակ նյութափոխանակության ակտիվացում.
Ստանդարտ AMES թեստը սովորաբար օգտագործում է առնետի լյարդի S9, որը չունի որոշակի մարդկային - համապատասխան CytoChrome P450 (CYP) ֆերմենտներ: Սա կարող է հանգեցնել proccrinogens- ի (օրինակ, որոշ n - ազոտային) կամ ոչ - մարդկային վտանգների գերակտիվացում: Օրինակ. Rat S9- ը վատ նյութափոխանակում է n - Nitrosodiethylamine (NDEA) համեմատ մարդկային ֆերմենտների հետ, վտանգելով կեղծ բացասականությունները:
- Սահմանափակ մուտացիայի սպեկտրի հայտնաբերում.
Ստանդարտ շտամներ (E.G., TA98, TA100) հայտնաբերում են միայն մուտացիայի հատուկ տեսակներ (Frameshifts, Base - Զույգ փոխարինումներ), անհայտ կորած կլիմենետիկ քաղցկեղներ:
- OVER - Ապավատումը մանրէային համակարգերին.
Քանի որ թեստը օգտագործում է Salmonella Typhimurium, այն չի հաշվի առնում կաթնասունների նորոգման մեխանիզմները, որոնք առկա են կաթնասուների բջիջներում, հնարավոր է բացակայում են որոշ մուտագենային էֆեկտներ:
- Կեղծ դրական եւ բացասականություններ.
Որոշ ոչ - Mutagenic միացություններ կարող են դրական արդյունքներ տալ մանրէային սթրեսի պատասխանների պատճառով, մինչդեռ որոշ մուտագներ, որոնք պահանջում են բարդ նյութափոխանակության ակտիվացում, կարող են չբացահայտվել:
Ընդլայնված Ames թեստը
EMA- ի վերջին թողարկումը Q & Որպես առաջնորդություն է նշում, որ որոշ N - Nitrosamines (E.G., NDMA) ցածր զգայունության պայմաններում առաջարկվում է FDA- ի թունաբանական հետազոտության ազգային կենտրոնի (ՀՌԱՀ) կողմից տրամադրված ուժեղացուցիչ AMES թեստի պայմանները: FDA- ն եզրակացրել է, որ AMES թեստի համար օգտագործվող ստանդարտ մեթոդները կարող են բավարար չեն N - Nitrosamines- ի մուտագենային ներուժը բնութագրելու համար: Ի պատասխան, FDA- ի տոքսիկոլոգիական հետազոտությունների ազգային կենտրոնը փորձարկում է տարբեր պայմաններ `բարելավված AMES թեստը մշակելու համար, ինչը նպատակ ունի տրամադրել N Nitrosamine- ի վնասակարության ավելի հուսալի գնահատական:
Հետեւյալ ուժեղացված AMES թեստը (ուտում) պայմանները տրամադրվում են FDA- ի կողմից
|
Թեստային շտամներ |
Ներառում է Salmonella Typhimurium TA98, TA100: TA1535, TA1537 եւ ESCHERICHIA COLI WP2 UVRA (PKM101) TEST LIFT |
|
Թեստի մեթոդ եւ նախնական - Մեկուսացման ժամանակը |
Նախնական - Մեկուսացում եւ ոչ պարծենկոտ եղանակներ պետք է օգտագործվեն, առաջարկվող նախնական - մեկուսացման ժամանակը 30 րոպե: |
|
S9 տեսակը եւ համակենտրոնացումը |
Ընդլայնված AMES թեստը պետք է իրականացվի պարունակող 30% առնետի լյարդի S9 եւ 30%Համստեր լյարդի S9Մի շարք Առնետը եւ Hamster Desmosomal գերբնականները (S9S) պետք է պատրաստվեն, որոնք վերաբերվում են կրծկալիցCytochrome P450 ֆերմենտ- Ներմուծող նյութեր (օրինակ, ֆենոբարբիտալի եւ β - Naphthoflavone): |
|
Բացասական (լուծիչ / արտադրանքի) հսկողություն |
Օգտագործված լուծիչները պետք է համատեղելի լինեն Ames Test- ի համաձայնOECD 471Ուղեցույցներ: Առկա լուծիչները ներառում են, բայց չեն սահմանափակվում միայն. (1) ջուր; (2) Օրգանական լուծիչներ, ինչպիսիք են ացետոնիտրիլը, մեթանոլը եւ Dimethyl Sulfoxide- ը (DMSO): Երբ օգտագործվում են օրգանական լուծիչներ, նախապես հնարավոր ծավալը պետք է օգտագործվի խառնուրդը: |
|
Դրական վերահսկողություն |
Համաձայն OECD 471 ցուցումների, լարում - Հատուկ դրական վերահսկողություն պետք է իրականացվի միեւնույն ժամանակ: S9- ի ներկայությամբ, երկու N - Nitrosamines- ը, որը հայտնի է, որ պետք է օգտագործվեն որպես դրական վերահսկողություն: Հասանելի n - Նիտրոսամինի դրական հսկիչները ներառում են. NDMA, 1 - Cyclopentyl - 4 - Nitrosopiperazine ndsris. |
|
Ames վճռականության վերաբերյալ բոլոր մյուս առաջարկությունները պետք է հետեւեն OECD 471 ցուցումներին |
|
Համստեր լյարդի S9 խմբակցության եզակի առավելություն
Համստեր լյարդի S9 կոտորակները հատկապես արժեքավոր են AMES թեստավորման մեջ `որոշակի n ակտիվացնելու իր բարձրակարգ ունակության պատճառով - Nitrosamines համեմատ առնետի լյարդի հետ: Այն կիսում է ավելի սերտ նյութափոխանակության պրոֆիլը մարդու լյարդի ֆերմենտներին, այն ավելի արդիական դարձնելով մարդու ռիսկի գնահատման համար: Բացի այդ, Hamster Living S9- ը պարունակում է հատուկ Cytochrome P450 ֆերմենտների ավելի բարձր մակարդակներ, որոնք շատ կարեւոր են մուտագների կենսաակտիվացման համար: Սա հանգեցնում է բարելավված զգայունության եւ կեղծիքի կրճատմանը - Բացասական դրույքաչափերը, թույլ տալով ավելի լավ հայտնաբերել մուտագների, որոնք այլ կերպ կարող են չբացահայտվել առնետի լյարդի հետ:
Եզրափակում
Թեեւ ստանդարտ AMES թեստը մնում է հիմնական գործիք `մուտագենության գնահատման համար, դրա սահմանափակումները անհրաժեշտ են բարելավումներ կատարել ավելի լավ ճշգրտության համար: Ընդլայնված AMES թեստը, մասնավորապես Համստեր լյարդի S9 հատվածի ընդգրկմամբ, զգալիորեն ուժեղացնում է N Nitrosamines- ի նման բարդ մուտարային մուտքի հայտնաբերումը: Այս առաջխաղացումը ապահովում է ավելի հուսալի մեթոդ `մարդկային հավանական քաղցկեղեները գնահատելու եւ աջակցում է կարգավորող ավելի լավ որոշմանը - Պատրաստում:
Keywords: N - Nitrosamines, NSRRIS, OECD 471, ուժեղացված AMES թեստ, Hamster Living S9, Cytochrome P450 ֆերմենտներ, մուտացիայի թեստ
Ժամը 2025 - 03 - 12 09:22:09