Hefðbundið ames próf
AME -prófið er mikið notað til að greina stökkbreytandi möguleika í efnasamböndum, þar með talið N - nitrósamín. Þrátt fyrir mikilvægi þess í eiturefnafræðilegri skimun hefur staðal Ames prófið nokkrar takmarkanir, sérstaklega við mat á efnasamböndum sem þurfa flókna efnaskiptavirkjun.
Takmarkanir á stöðluðu ames prófinu
Þó að Ames prófið sé áfram hornsteinn í stökkbreytingarprófum, hefur það ákveðnar takmarkanir:
- Takmörkuð virkjun efnaskipta:
Hefðbundna Ames prófið notar venjulega rottu lifur S9, sem skortir ákveðna manna - viðeigandi cýtókróm P450 (CYP) ensím. Þetta getur leitt til vanvirkni procarcinogens (t.d. sumra n - nítrósamína) eða ofvirkni á hættum sem ekki eru - manna. Dæmi: Rottu S9 umbrotið illa umbrot N - nitrosódíetýlamín (NDEA) samanborið við ensím úr mönnum, sem hætta á rangar neikvæðar.
- Takmörkuð uppgötvun stökkbreytinga:
Hefðbundnir stofnar (t.d. TA98, TA100) greina aðeins sértækar stökkbreytingartegundir (rammamyndir, grunn - paraskipti), vantar clastogens eða erfðaefni krabbameinsvaldandi.
- Yfir - treysta á bakteríiskerfi:
Þar sem prófið notar Salmonella typhimurium, þá gerir það ekki grein fyrir DNA viðgerðarbúnaði sem er til staðar í spendýrafrumum, sem hugsanlega vantar nokkur stökkbreytandi áhrif.
- Rangar jákvæðar og neikvæðar:
Sum stökkbreytandi efnasambönd geta skilað jákvæðum árangri vegna bakteríuálagssvörunar, meðan sumir stökkbreytingar sem þurfa flókna efnaskiptavirkjun geta orðið ógreindir.
Auka Ames prófið
Nýjasta útgáfan og leiðsögn EMA segir að vegna lítillar næmni sumra n - nítrósamína (t.d. NDMA) við skilyrði stöðluðu Ames prófsins er mælt með skilyrðum aukinnar AME -prófs sem veitt er af National Center for Toxicological Research (NCTR). FDA hefur komist að þeirri niðurstöðu að stöðluðu aðferðirnar sem notaðar eru við AME -prófið gætu ekki verið nægar til að einkenna stökkbreytandi möguleika n - nítrósamína og í sumum tilvikum geta skilað neikvæðum niðurstöðum fyrir þekkt stökkbreytandi nítrósamín. Til að bregðast við hefur National Center for Toxicological Research verið að prófa mismunandi aðstæður til að þróa aukna Ames prófið, sem er ætlað að veita áreiðanlegri mat á stökkbreytandi möguleika n - nitrósamín óhreininda.
Eftirfarandi aukið AMES próf (EAT) eru veitt af FDA
|
Prófa stofna |
Inniheldur Salmonella Typhimurium TA98, TA100. TA1535, TA1537 og Escherichia coli WP2 UVRA (PKM101) prófunarstofn |
|
Prófunaraðferð og for - Einangrunartími |
Nota skal fyrir - einangrun og ekki - flatbeðferðir, með ráðlagðri fyrirfram - einangrunartíma 30 mínútur. |
|
S9 gerð og einbeiting |
Aukið AMES próf ætti að framkvæma í 30% rottu lifur S9 og 30%Hamstur lifur S9. Rottu og hamstur desmosomal supernatants (S9s) ætti að vera útbúa úr nagdýrum lifur sem eru meðhöndlaðar meðCýtókróm P450 ensím- örvandi efni (t.d. sambland af fenobarbital og β - naftoflavone). |
|
Neikvæð (leysir/hjálparefni) stjórnun |
Leysin sem notuð eru ættu að vera samhæf við Ames prófið samkvæmtOECD 471Leiðbeiningar. Fyrirliggjandi leysiefni innihalda, en eru ekki takmörkuð við: (1) vatn; (2) Lífræn leysiefni eins og asetónítríl, metanól og dímetýlsúlfoxíð (DMSO). Þegar lífræn leysiefni eru notuð ætti að nota lægsta mögulega rúmmál í for - Holding blöndunni og sýna skal á að magn lífræns leysis sem notað er truflar ekki efnaskiptavirkjun n - nitrósamína. |
|
Jákvæð stjórn |
Samkvæmt leiðbeiningum OECD 471 ætti að framkvæma álag - sértækar jákvæðar stjórntæki á sama tíma. Í viðurvist S9 ættu einnig að nota nítrósamínin tvö sem vitað er að eru stökkbreytandi sem jákvæð viðmið. Laus n - nítrósamín jákvætt stjórntæki fela í sér: ndma, 1 - cyclopentyl - 4 - nitrosopiperazine ndsris。 |
|
Allar aðrar ráðleggingar um ákvörðun AMEs ættu að fylgja OECD 471 leiðbeiningum |
|
Einstakur kostur við hamstur lifrar S9 brot
Hamstur S9 brot er sérstaklega dýrmætt í AME -prófunum vegna yfirburða getu þess til að virkja ákveðin N - nitrósamín samanborið við rottu lifur S9. Það deilir nánari efnaskiptum við lifrarensím hjá mönnum, sem gerir það viðeigandi fyrir áhættumat manna. Að auki inniheldur lifrar S9 hamstur hærra magn af sértækum cýtókróm P450 ensímum, sem skipta sköpum fyrir lífvirkjun stökkbreytinga. Þetta hefur í för með sér bætt næmi og minnkaði rangar - neikvæða tíðni, sem gerir kleift að greina stökkbreytingar sem annars geta verið ógreindir með rottu lifur S9 eingöngu.
Niðurstaða
Þó að venjulega Ames prófið sé áfram grundvallaratriði til að meta stökkbreytingu, þá eru takmarkanir þess að gera endurbætur á betri nákvæmni. Aukið Ames prófið, sérstaklega með því að taka upp Hamster lifur S9 brot, eykur verulega greiningu flókinna stökkbreytna eins og N - nítrósamína, sem brúar bilið milli umbrots baktería og spendýra. Þessi framþróun veitir áreiðanlegri aðferð til að meta mögulega krabbameinsvaldandi krabbameinsvald og styður betri ákvarðanir um reglugerðir - gerð.
Lykilorð: N - Nítrósamín, NDSris, OECD 471, Auka Ames próf, hamstur lifur S9, cýtókróm P450 ensím, stökkbreytingarpróf
Pósttími: 2025 - 03 - 12 09:22:09