AMESテストの強化

標準的なエイムステスト

AMESテストは、N -ニトロソアミンを含む化合物の変異原性の可能性を検出するための広く利用されているアッセイです。毒物学的スクリーニングにおけるその重要性にもかかわらず、標準的なAMESテストには、特に複雑な代謝活性化を必要とする化合物を評価する場合、いくつかの制限があります。

標準のAMESテストの制限

AMESテストは変異原性テストの基礎のままですが、特定の制限があります。

• 限られた代謝活性化：

標準のAMESテストでは通常、ラット肝臓S9を使用します。これには、特定のヒト-関連するシトクロムP450（CYP）酵素がありません。これにより、プロカルシノゲンの活性化（たとえば、いくつかのn -ニトロソアミン）または非-人間の危険の過剰活性化につながる可能性があります。例：ラットS9は、ヒト酵素と比較してN -ニトロソジエチルアミン（NDEA）を不十分に代謝し、偽陰性を危険にさらします。

• 限られた突然変異スペクトル検出：

標準株（例：TA98、TA100）は、特定の突然変異タイプ（フレームシフト、ベース-ペア置換）のみ、欠落しているクラストゲンまたはエピジェネティック発がん物質のみを検出します。

• 過剰-細菌システムへの依存：

このテストでは、サルモネラTyphimuriumを使用しているため、哺乳類細胞に存在するDNA修復メカニズムを考慮しておらず、いくつかの変異原性効果が潜在的に欠落しています。

• 誤検知とネガ：

一部の非変異原性化合物は、細菌のストレス反応のために陽性の結果をもたらす可能性がありますが、複雑な代謝活性化を必要とするいくつかの変異体は検出されない場合があります。

強化されたAMESテスト

EMAの最新リリースQ＆as Guidanceは、標準的なAMESテストの条件下でのN -ニトロソアミン（NDMAなど）の感度が低いため、FDAの国立毒物学研究センター（NCTR）が提供するAMESテストの強化条件が推奨されると述べています。 FDAは、AMESテストに使用される標準的な方法は、N -ニトロソアミンの変異原性の可能性を特徴付けるのに十分ではない可能性があると結論付けており、場合によっては既知の変異原性ニトロソアミンに対して負の結果をもたらす可能性があります。これに応じて、FDAの国立毒性研究センターは、N -ニトロソアミン不純物の変異原性の可能性のより信頼性の高い評価を提供することを目的とした、強化されたAMESテストを開発するためにさまざまな状態をテストしています。

以下の拡張されたAMESテスト（EAT）条件はFDAによって提供されます

ハムスター肝臓S9分数のユニークな利点

ハムスター肝臓S9画分は、ラット肝臓S9と比較して特定のN -ニトロソアミンを活性化する能力が優れているため、AMESテストで特に価値があります。ヒトの肝臓酵素に綿密な代謝プロファイルを共有しており、人間のリスク評価により関連しています。さらに、ハムスター肝臓S9には、変異体の生物活性化に不可欠な、より高いレベルの特定のシトクロムP450酵素が含まれています。これにより、感度が向上し、誤った速度が低下し、ネガティブレートが減少し、ラット肝臓S9のみで検出されないようにする可能性のある変異体の検出が改善されます。

結論

標準的なAMESテストは、変異原性を評価するための基本的なツールのままですが、その制限はより良い精度のために改善を必要とします。強化されたAMESテストは、特にハムスター肝臓S9画分を含めると、N -ニトロソミンのような複雑な変異体の検出を大幅に強化し、細菌と哺乳類の代謝の間の隙間を埋めます。この進歩は、潜在的なヒト発がん物質を評価するためのより信頼性の高い方法を提供し、より良い規制上の決定をサポートします-

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