სტანდარტული AMES ტესტი
AMES ტესტი არის ფართოდ გამოყენებული გამოკვლევა ქიმიურ ნაერთებში მუტაგენური პოტენციალის გამოსავლენად, მათ შორის N - ნიტროზამინების ჩათვლით. ტოქსიკოლოგიური სკრინინგის მნიშვნელობის მიუხედავად, AMES– ის სტანდარტულ ტესტს აქვს რამდენიმე შეზღუდვა, განსაკუთრებით მაშინ, როდესაც შეაფასებს ნაერთებს, რომლებიც მოითხოვს მეტაბოლურ გააქტიურებას.
სტანდარტული AMES ტესტის შეზღუდვები
მიუხედავად იმისა, რომ AMES ტესტი რჩება ქვაკუთხედი მუტაგენურობის ტესტირებაში, მას აქვს გარკვეული შეზღუდვები:
- შეზღუდული მეტაბოლური გააქტიურება:
სტანდარტული AMES ტესტი, როგორც წესი, იყენებს ვირთხის ღვიძლის S9- ს, რომელსაც არ აქვს გარკვეული ადამიანი - შესაბამისი ციტოქრომ P450 (CYP) ფერმენტები. ამან შეიძლება გამოიწვიოს პროკარცინოგენების (მაგ., ზოგიერთი n - ნიტროზამინების) ანაქტივაცია ან არა - ადამიანის საფრთხეების გადაჭარბება. მაგალითი: ვირთხა S9 ცუდად მეტაბოლიზირებს n - nitrosodiethylamine (NDEA) ადამიანის ფერმენტებთან შედარებით, რისკავს ცრუ ნეგატივებს.
- შეზღუდული მუტაციის სპექტრის გამოვლენა:
სტანდარტული შტამები (მაგ., TA98, TA100) გამოვლენილია მხოლოდ სპეციფიკური მუტაციის ტიპები (ჩარჩოები, ბაზა - წყვილი ჩანაცვლება), დაკარგული კლასტოგენები ან ეპიგენეტიკური კარცინოგენები.
- მეტი - ბაქტერიული სისტემებისადმი დამოკიდებულება:
მას შემდეგ, რაც ტესტი იყენებს Salmonella Typhimurium- ს, იგი არ ითვალისწინებს ძუძუმწოვრების უჯრედებში არსებულ დნმ -ის აღდგენის მექანიზმებს, რაც პოტენციურად აკლია მუტაგენურ ეფექტს.
- ყალბი პოზიტივები და ნეგატივები:
ზოგიერთი არა - მუტაგენური ნაერთი შეიძლება გამოიწვიოს დადებითი შედეგები ბაქტერიული სტრესის რეაქციების გამო, ხოლო ზოგიერთი მუტაგენი, რომელიც მოითხოვს მეტაბოლურ გააქტიურებას, შეიძლება გამოვლინდეს.
გაძლიერებული ამეს ტესტი
EMA– ს უახლესი გამოშვების Q & As– ის სახელმძღვანელო ნათქვამია, რომ ზოგიერთი N - nitrosamines– ის (მაგ., NDMA) დაბალი მგრძნობელობის გამო, სტანდარტული AMES ტესტის პირობებში, რეკომენდებულია FDA– ს ტოქსიკოლოგიური კვლევების ეროვნული ცენტრის მიერ გათვალისწინებული AMES– ის ტესტის პირობები. FDA– მ დაასკვნა, რომ AMES ტესტისთვის გამოყენებული სტანდარტული მეთოდები შეიძლება არ იყოს საკმარისი N - nitrosamines– ის მუტაგენური პოტენციალის დასადგენად, ზოგიერთ შემთხვევაში კი შეიძლება გამოიწვიოს უარყოფითი შედეგები ცნობილი მუტაგენური ნიტროზამინებისთვის. ამის საპასუხოდ, FDA– ს ტოქსიკოლოგიური კვლევების ეროვნულმა ცენტრმა შემოწმდა სხვადასხვა პირობები, რათა შეიმუშაოს AMES– ის გაუმჯობესებული ტესტი, რომელიც მიზნად ისახავს N - ნიტროზამინის მინარევების მუტაგენური პოტენციალის უფრო საიმედო შეფასებას.
შემდეგი გაძლიერებული AMES ტესტის (EAT) პირობები მოცემულია FDA– ს მიერ
|
ტესტის შტამები |
მოიცავს Salmonella Typhimurium TA98, TA100. TA1535, TA1537 და Escherichia coli WP2 UVRA (PKM101) ტესტის შტამი |
|
ტესტის მეთოდი და წინასწარი - საიზოლაციო დრო |
წინასწარი - იზოლაცია და არა - Flatbedding მეთოდები უნდა იქნას გამოყენებული, რეკომენდებული წინასწარი - საიზოლაციო დრო 30 წუთის განმავლობაში. |
|
S9 ტიპი და კონცენტრაცია |
გაძლიერებული AMES ტესტი უნდა ჩატარდეს 30% ვირთხების ღვიძლის S9 და 30%ზაზუნის ღვიძლი S9. ვირთხისა და ზაზუნის დესომოსომული სუპერნატანტები (S9s) უნდა მომზადდეს მღრღნელების ღვიძლისგანციტოქრომ P450 ფერმენტი- ინდუქციური ნივთიერებები (მაგ., ფენობარბიტალი და β - ნაფტოფლავონის ერთობლიობა). |
|
უარყოფითი (გამხსნელი/ექსკლუზიური) კონტროლი |
გამოყენებული გამხსნელები უნდა შეესაბამებოდეს ამეს ტესტსOECD 471სახელმძღვანელო მითითებები. ხელმისაწვდომი გამხსნელები მოიცავს, მაგრამ არ შემოიფარგლება მხოლოდ: (1) წყალი; (2) ორგანული გამხსნელები, როგორიცაა აცეტონიტრილი, მეთანოლი და დიმეთილ სულფოქსიდი (DMSO). ორგანული გამხსნელების გამოყენებისას, წინასწარ უნდა იქნას გამოყენებული წინასწარი - ჰოლდინგის ნარევის ყველაზე დაბალი შესაძლო მოცულობა და უნდა იქნას ცხადყო, რომ გამოყენებული ორგანული გამხსნელის რაოდენობა არ ერევა N - ნიტროზამინების მეტაბოლურ გააქტიურებას. |
|
პოზიტიური კონტროლი |
OECD 471 სახელმძღვანელო მითითების თანახმად, შტამი - სპეციფიკური დადებითი კონტროლი უნდა განხორციელდეს ერთდროულად. S9– ის თანდასწრებით, ორი N - ნიტროზამინი, რომელიც ცნობილია მუტაგენური, ასევე უნდა იქნას გამოყენებული, როგორც დადებითი კონტროლი. ხელმისაწვდომია n - ნიტროზამინის დადებითი კონტროლი მოიცავს: NDMA, 1 - ციკლოპენტილ |
|
ყველა სხვა რეკომენდაცია AMES განსაზღვრის შესახებ უნდა დაიცვას OECD 471 სახელმძღვანელო მითითება |
|
ზაზუნის ღვიძლის S9 ფრაქციის უნიკალური უპირატესობა
ზაზუნის ღვიძლის S9 ფრაქცია განსაკუთრებით ღირებულია AMES ტესტირებაში, მისი უმაღლესი უნარის გამო, გარკვეული N - ნიტროზამინების გააქტიურების გამო, ვირთხის ღვიძლის S9- სთან შედარებით. იგი უზიარებს მეტაბოლურ პროფილს ადამიანის ღვიძლის ფერმენტებს, რაც მას უფრო აქტუალური გახდის ადამიანის რისკის შეფასებისთვის. გარდა ამისა, ზაზუნის ღვიძლის S9 შეიცავს სპეციფიკურ ციტოქრომ P450 ფერმენტების უფრო მაღალ დონეს, რომლებიც გადამწყვეტია მუტაგენების ბიოაქტივაციისთვის. ეს იწვევს გაუმჯობესებულ მგრძნობელობას და შემცირდა ყალბი - უარყოფითი მაჩვენებლები, რაც საშუალებას აძლევს მუტაგენების უკეთეს გამოვლენას, რაც სხვაგვარად შეიძლება გამოვლინდეს მხოლოდ ვირთხის ღვიძლის S9- ით.
დასკვნა
მიუხედავად იმისა, რომ სტანდარტული AMES ტესტი რჩება ფუნდამენტურ ინსტრუმენტად მუტაგენურობის შესაფასებლად, მისი შეზღუდვები უკეთეს სიზუსტის გაუმჯობესებას მოითხოვს. გაძლიერებული AMES ტესტი, განსაკუთრებით ზაზუნის ღვიძლის S9 ფრაქციის ჩართვით, მნიშვნელოვნად აძლიერებს N - nitrosamines- ის რთული მუტაგენების გამოვლენას, ბაქტერიულ და ძუძუმწოვრების მეტაბოლიზმს შორის უფსკრული. ეს წინსვლა იძლევა უფრო საიმედო მეთოდს ადამიანის პოტენციური კანცეროგენების შესაფასებლად და მხარს უჭერს რეგულირების უკეთეს გადაწყვეტილებას - მიღებას.
საკვანძო სიტყვები: N - Nitrosamines, NDSRIS, OECD 471, გაძლიერებული AMES ტესტი, ზაზუნის ღვიძლის S9, ციტოქრომ P450 ფერმენტები, მუტაციის ტესტი
პოსტის დრო: 2025 - 03 - 12 09:22:09