Стандартты AMES тесті
AMES тесті - бұл химиялық қосылыстардағы мутагендік әлеуетті, оның ішінде Nitrosamines-тегі мутагендік әлеуетті анықтау үшін кеңінен қолданылатын талдау. Токсикологиялық скринингтің маңыздылығына қарамастан, стандартты AMES тестінде бірнеше шектеулер бар, атап айтқанда, кешенді метаболизмді қажет ететін қосылыстарды бағалау кезінде.
Стандартты AMES тестінің шектеулері
AMES тесті мутагеникілік сынағының негізі болып қала береді, оның белгілі бір шектеулері бар:
- Метаболикалық шектеулі активация:
Стандартты AMES тестілеуі әдетте белгілі бір адамның егеуқұйрықтарын пайдаланады, ол белгілі бір адам жоқ - Бұл пропорционогендердің жеткіліксіз болуына әкелуі мүмкін (мысалы, Nitrosamines) немесе - Адамның қауіптілігі туралы. Мысал: егеуқұйрық S9 N - NITrosodiethylamine (NDEA), Nitrosodiethylamine (NDEA), адам ферменттерімен салыстырғанда, жалған негативтерге қауіп төндіреді.
- Муттың шектеулі анықтамасы:
Стандартты штамдар (мысалы, TA98, TA98, TA100) тек белгілі бір мутация түрлерін (фарфешттар, негіз - жұп алмастырғыштар) анықтайды, жетіспейтін кластерондар немесе эпиггенетикалық канцерогендер.
- Бактериялық жүйелерге сену:
Тесттен бастап Salmonella Dichimurium қолданғандықтан, ол сүтқоректалдық жасушаларда кездесетін ДНҚ жөндеу механизмдерін есепке алмайды, бұл кейбір мутагендік әсерлерсіз.
- Жалған позитивтер мен негативтер:
Кейбір емес.
Жақсартылған AMES тесті
EMA-ның Q & AS-ге жаңа шығарылымы кейбір n - нитросаминдер (мысалы, NTROSAMINS), стандартты AMES Test жағдайында, FDA компаниясының Токсикологиялық зерттеулер орталығы (NCTR) ұсынған EMES тестінің шарттары ұсынылған. FDA AMES сынағы үшін қолданылатын стандартты әдістер N - Nitrosamines мутагендік әлеуетін сипаттау үшін жеткіліксіз болуы мүмкін, ал кейбір жағдайларда белгілі эмогендік нитросаминдер үшін теріс нәтиже пайда болуы мүмкін. Жауап ретінде FDA-ның токсикологиялық зерттеулер орталығы Nitrosamine қоспаларының мутагендік әлеуетін нығайтуға арналған жетілдірілген AMES тестін дамыту үшін әртүрлі жағдайларды сынақтан өткізді.
Төменде жетілдірілген AMES тесті (EAT) шарттары FDA қамтамасыз етеді
|
Тест штамдары |
Құрамында Salmonella ta98, TA100 кіреді. TA1535, TA1537 және Escherichia Coli WP2 УКРА (PKM101) тест штаммы |
|
Тест әдісі және алдын-ала - оқшаулау уақыты |
Алдын ала - оқшаулау және қоспағанда, жалпақ тәрізділердің әдістері ұсынылған алдын-ала алдын-ала көрсетіліп, 30 минуттан тұрады. |
|
S9 түрі мен концентрациясы |
Жақсартылған AMES тесті 30% егеуқұйрықты егеуқұйрығы S9 және 30% орындау керекХомстер бауыр S9. Егеуқұйрық пен Хомстердің десмосомалық супернатранттары (S9S) кеміргіштерден дайындалған сулардан дайын болуы керекCytochrome P450 ферменті- Іске шығаратын заттар (мысалы, фенобарбитал және β - нафтофлавон) комбинациясы. |
|
Теріс (еріткіш / экшникалық) бақылау |
Пайдаланылған еріткіштер AMES Test-ке сәйкес болуы керекЭЫДО 471Нұсқаулық. Қол жетімді еріткіштерге кіреді, бірақ олармен шектелмейді: (1) су; (2) ацетонитриил, метанол және диметил сульфоксиді (DMSO) сияқты органикалық еріткіштер. Органикалық еріткіштер қолданылған кезде, алдын-ала - Қоспаны ұстау керек, алдану мүмкіндігін пайдалану керек және қолданылған органикалық еріткіштің мөлшері N - Nitrosamines метаболикалық активациясына кедергі келтірмейтіндігін көрсету керек. |
|
Оң бақылау |
ЭЫДҰ-ға сәйкес 471 нұсқаулық бойынша, штамм - Бір уақытта нақты оң бақылауды жүзеге асыру керек. S9 қатысуымен екі n - Мутагенді білдіретін нитросаминдер де оң бақылау ретінде қолданылуы керек. Қол жетімді n - Nitrosamine оң басқару элементтері: NDMA, 1 - циклопенсіз - 4 - NITROSOPIPERAZINE NDSRIS. |
|
AMES анықтамасы бойынша барлық басқа ұсыныстар ЭЫДҰ 471 нұсқауларын орындауы керек |
|
Hamster Liver S9 фракциясының ерекше артықшылығы
Hamster Liver S9 фракциясы AMES-тің сынуында, әсіресе, белгілі N - Nitrosamines-ті, Nitrosamines-ті егеуқұйрықтарға қарағанда егеуқұйрықтардың егеуқұйрығына қарағанда егеушілері S9-мен салыстырады. Ол адамның бауыр ферменттеріне жақын метаболикалық профильмен бөліседі, бұл оны адамзаттың тәуекелін бағалау үшін маңызды етеді. Сонымен қатар, Hamster Liver S9-да мутагендердің биоактививациясы үшін өте маңызды нақты цитохромды P450 ферменттерінің жоғары деңгейлері бар. Бұл сезімталдықтың жақсаруына және жалғандыққа әкеледі, ал теріс көрсеткіштер теріс тарифтер, бұл басқаша, басқаша анықтауға мүмкіндік беретін теріс тарифтер.
Қорытынды
Стандартты AMES Test тестілеуі мутагениклілікті бағалаудың негізгі құралы болып қала береді, оның шектеулері дәлдікті жақсартуды қажет етеді. Жақсартылған AMES тесті, әсіресе Hamster Liver S9 фракциясының қосылуымен, N - Nitrosamines, бактериалды және сүтқоректілер алмасуының арасындағы алшақтықты жоюды айтарлықтай жақсартады. Бұл ілгерілету адамдық канцерогендерді бағалаудың сенімді әдісін ұсынады және нормативтік шешімнің жақсы шешімін қолдайды. - Жасау.
Түйін сөздер: N - Nitrosamines, NDSRIS, OECD 471, жақсартылған AMES Test, Hamster Liver S9, Cytochrome P450 ферменттері, мутация сынағы
POST уақыты: 2025 - 03 - 03 - 12 09:22:09