향상된 에임스 테스트

표준 AMES 테스트

AMES 시험은 N - 니트로사민을 포함한 화학적 화합물에서 돌연변이 유발 전위를 검출하기위한 널리 활용 된 분석법이다. 독성 학적 스크리닝에서의 중요성에도 불구하고, 표준 AMES 테스트는 특히 복잡한 대사 활성화가 필요한 화합물을 평가할 때 몇 가지 한계가 있습니다.

표준 AMES 테스트의 한계

AMES 테스트는 돌연변이 유발 성 테스트의 초석으로 남아 있지만 특정 제한 사항이 있습니다.

• 제한된 대사 활성화 :

표준 AMES 테스트는 일반적으로 쥐 간 S9를 사용하는데, 이는 특정 인간 - 관련 시토크롬 P450 (CYP) 효소가 부족합니다. 이것은 프로 카르 시노겐 (예를 들어, 일부 n - 니트로사민)의 활성화 또는 비 인간 위험의 과잉 활성화로 이어질 수있다. 예 : RAT S9는 인간 효소에 비해 N - 니트로 소제 에틸 아민 (NDEA)을 잘 대사하여 잘못된 부정을 위험에 빠뜨립니다.

• 제한된 돌연변이 스펙트럼 검출 :

표준 균주 (예를 들어, TA98, TA100)는 특정 돌연변이 유형 (프레임 시프트,베이스 - 쌍 치환), 누락 된 클라스토겐 또는 후성 유전 적 발암 물질 만 검출합니다.

• 과도한 - 박테리아 시스템에 대한 의존 :

이 시험은 살모넬라 티피 무리 움을 사용하기 때문에 포유 동물 세포에 존재하는 DNA 복구 메커니즘을 설명하지 않으므로 잠재적으로 일부 돌연변이 유발 효과가 누락됩니다.

• 잘못된 양성 및 부정적인 것 :

일부 비 돌연변이 성 화합물은 박테리아 스트레스 반응으로 인해 양성 결과를 생성 할 수있는 반면, 복잡한 대사 활성화를 필요로하는 일부 돌연변이 인은 감지되지 않을 수있다.

향상된 AMES 테스트

EMA의 최신 릴리스 Q & A 지침에 따르면 표준 AMES 테스트 조건 하에서 일부 N 니트로사민 (예를 들어, NDMA)의 감도가 낮기 때문에 FDA의 NCTR (National Center for Toxicological Research)이 제공 한 강화 된 AMES 테스트 조건이 권장된다고 명시되어 있습니다. FDA는 AMES 시험에 사용 된 표준 방법이 N - 니트로사민의 돌연변이 유발 전위를 특성화하기에 충분하지 않을 수 있으며, 어떤 경우에는 알려진 돌연변이 유발 니트로 사민에 대해 부정적인 결과를 생성 할 수 있다고 결론 지었다. 이에 따라 FDA의 독성 연구를위한 국립 센터 (National Center for Toxicological Research)는 N - 니트로사민 불순물의 돌연변이 유발 가능성에 대한보다 신뢰할 수있는 평가를 제공하기위한 강화 된 AMES 테스트를 개발하기 위해 다양한 조건을 테스트하고있다.

FDA에서 다음과 같은 강화 된 AMES 테스트 (EAT) 조건을 제공합니다.

햄스터 간 S9 분획의 독특한 장점

햄스터 간 S9 분획은 쥐 간 S9와 비교하여 특정 N - 니트로사민을 활성화시키는 우수한 능력으로 인해 AMES 테스트에서 특히 가치가 있습니다. 그것은 인간 간 효소에 더 가까운 대사 프로파일을 공유하여 인간 위험 평가와 더 관련이 있습니다. 또한, 햄스터 간 S9는 더 높은 수준의 특정 시토크롬 P450 효소를 함유하며, 이는 돌연변이 인의 생물 활성화에 중요합니다. 이로 인해 감도가 향상되고 거짓 - 음성 속도가 감소하여 쥐 간 S9만으로 감지 될 수있는 돌연변이 인을 더 잘 검출 할 수 있습니다.

결론

표준 AMES 테스트는 돌연변이 형성을 평가하기위한 기본 도구로 남아 있지만, 그 한계는 더 나은 정확도를 위해 개선이 필요합니다. 특히 햄스터 간 S9 분획이 포함 된 강화 된 AMES 테스트는 N - 니트로사민과 같은 복잡한 돌연변이 원의 검출을 크게 향상시켜 박테리아와 포유 동물 대사 사이의 간격을 연결합니다. 이 발전은 잠재적 인 인간 발암 물질을 평가하기위한보다 신뢰할 수있는 방법을 제공하며 더 나은 규제 결정 -

키워드 : N - Nitrosamines, NDSRIS, OECD 471, Enhanced Ames Test, Hamster Liver S9, Cytochrome P450 효소, 돌연변이 테스트