Ujian Ames Standard
Ujian AMES adalah ujian yang digunakan secara meluas untuk mengesan potensi mutagenik dalam sebatian kimia, termasuk N - nitrosamines. Walaupun kepentingannya dalam pemeriksaan toksikologi, ujian AMES standard mempunyai beberapa batasan, terutamanya apabila menilai sebatian yang memerlukan pengaktifan metabolik kompleks.
Batasan ujian AMES standard
Walaupun ujian Ames kekal sebagai asas dalam ujian mutagenik, ia mempunyai batasan tertentu:
- Pengaktifan metabolik terhad:
Ujian AMES standard biasanya menggunakan hati tikus S9, yang tidak mempunyai enzim cytochrome P450 (CYP) yang relevan manusia. Ini boleh menyebabkan pengaktifan procarcinogens (mis., Beberapa n - nitrosamines) atau overactivation bukan bahaya manusia. Contoh: Tikus S9 kurang metabolisme N - nitrosodiethylamine (NDEA) berbanding enzim manusia, mempertaruhkan negatif palsu.
- Pengesanan Spektrum Mutasi Terhad:
Strain standard (mis., TA98, TA100) mengesan hanya jenis mutasi tertentu (frameshifts, asas - penggantian pasangan), hilang clastogens atau karsinogen epigenetik.
- Lebih - Bergantung pada sistem bakteria:
Oleh kerana ujian menggunakan Salmonella typhimurium, ia tidak menyumbang kepada mekanisme pembaikan DNA yang terdapat dalam sel -sel mamalia, berpotensi kehilangan beberapa kesan mutagenik.
- Positif dan negatif palsu:
Sesetengah sebatian mutagenik tidak menghasilkan hasil yang positif disebabkan oleh tindak balas tekanan bakteria, sementara beberapa mutagen yang memerlukan pengaktifan metabolik kompleks mungkin tidak dapat dikesan.
Ujian Ames yang dipertingkatkan
Panduan Q & As yang terbaru EMA menyatakan bahawa disebabkan oleh kepekaan yang rendah dari beberapa nitrosamines N (mis., NDMA) di bawah syarat -syarat ujian AMES standard, syarat -syarat ujian AMES yang dipertingkatkan yang disediakan oleh Pusat Kebangsaan FDA untuk Penyelidikan Toksikologi (NCTR) adalah disyorkan. FDA telah membuat kesimpulan bahawa kaedah standard yang digunakan untuk ujian AMES mungkin tidak mencukupi untuk mencirikan potensi mutagenik nitrosamines, dan dalam beberapa kes boleh menghasilkan hasil negatif untuk nitrosamines mutagenik yang diketahui. Sebagai tindak balas, Pusat Penyelidikan Toksikologi Kebangsaan FDA telah menguji keadaan yang berbeza untuk membangunkan ujian AMES yang dipertingkatkan, yang bertujuan untuk memberikan penilaian yang lebih dipercayai mengenai potensi mutagenik kekotoran nitrosamine.
Keadaan ujian Ames (EAT) yang dipertingkatkan disediakan oleh FDA
|
Strain ujian |
Termasuk Salmonella Typhimurium TA98, TA100. TA1535, TA1537 dan Escherichia coli Ketegangan ujian WP2 UVRA (PKM101) |
|
Kaedah Ujian dan Pra - Masa Penebat |
Kaedah Pra - Penebat dan Bukan - Flatbedding hendaklah digunakan, dengan masa penebat pra - yang disyorkan selama 30 minit. |
|
Jenis dan kepekatan S9 |
Ujian AMES yang dipertingkatkan harus dilakukan dalam mengandungi 30% hati tikus S9 dan 30%Hamster Hati S9. Supernatan desmosomal tikus dan hamster (S9s) harus disediakan dari hati tikus yang dirawat denganenzim cytochrome P450- bahan yang mendorong (mis., Gabungan phenobarbital dan β - naphthoflavone). |
|
Kawalan negatif (pelarut/excipient) |
Pelarut yang digunakan harus bersesuaian dengan ujian AMES mengikutOECD 471garis panduan. Pelarut yang ada termasuk, tetapi tidak terhad kepada: (1) air; (2) Pelarut organik seperti asetonitril, metanol, dan dimetil sulfoksida (DMSO). Apabila pelarut organik digunakan, jumlah terendah yang mungkin dalam campuran pra - harus digunakan dan harus ditunjukkan bahawa jumlah pelarut organik yang digunakan tidak mengganggu pengaktifan metabolik N - nitrosamines. |
|
Kawalan positif |
Menurut garis panduan OECD 471, ketegangan - Kawalan positif khusus harus dilakukan pada masa yang sama. Dengan kehadiran S9, kedua -dua nitrosamines yang dikenali sebagai mutagenik juga harus digunakan sebagai kawalan positif. Tersedia N - Nitrosamine Kawalan Positif Termasuk: NDMA, 1 - Cyclopentyl - 4 - Nitrospopiperazine NDSRIS。 |
|
Semua cadangan lain mengenai penentuan AMES harus mengikuti garis panduan OECD 471 |
|
Kelebihan unik Hamster Hati S9 pecahan
Pecahan hati Hamster S9 sangat berharga dalam ujian Ames kerana keupayaan unggul untuk mengaktifkan nitrosamine N - berbanding dengan hati tikus S9. Ia berkongsi profil metabolik yang lebih dekat kepada enzim hati manusia, menjadikannya lebih relevan untuk penilaian risiko manusia. Di samping itu, Hamster Hati S9 mengandungi tahap enzim cytochrome P450 yang lebih tinggi, yang penting untuk bioaktivasi mutagens. Ini mengakibatkan kepekaan yang lebih baik dan dikurangkan kadar negatif palsu, yang membolehkan pengesanan mutagen yang lebih baik yang mungkin tidak dapat dikesan dengan hati tikus S9 sahaja.
Kesimpulan
Walaupun ujian AMES standard kekal sebagai alat asas untuk menilai mutagenik, batasannya memerlukan penambahbaikan untuk ketepatan yang lebih baik. Ujian Ames yang dipertingkatkan, terutamanya dengan kemasukan pecahan hati S9 hamster, dengan ketara meningkatkan pengesanan mutagen kompleks seperti N - nitrosamines, merapatkan jurang antara metabolisme bakteria dan mamalia. Kemajuan ini menyediakan kaedah yang lebih dipercayai untuk menilai potensi karsinogen manusia dan menyokong keputusan pengawalseliaan yang lebih baik - Membuat.
Kata kunci: n - nitrosamines, ndsris, OECD 471, ujian Ames yang dipertingkatkan, hati hamster S9, enzim cytochrome P450, ujian mutasi
Masa Pos: 2025 - 03 - 12 09:22:09