Teste de Ames padrão
O teste AMES é um ensaio amplamente utilizado para detectar o potencial mutagênico em compostos químicos, incluindo nitrosaminas. Apesar de seu significado na triagem toxicológica, o teste de Ames padrão tem várias limitações, principalmente ao avaliar compostos que requerem ativação metabólica complexa.
Limitações do teste de Ames padrão
Embora o teste de Ames continue sendo uma pedra angular nos testes de mutagenicidade, ele tem certas limitações:
- Ativação metabólica limitada:
O teste AMES padrão normalmente usa o fígado de rato S9, que não possui certas enzimas humanas - relevantes do citocromo P450 (CYP). Isso pode levar à subativação de procarcinógenos (por exemplo, algumas n - nitrosaminas) ou superativação de riscos não humanos. Exemplo: O rato S9 metaboliza mal a n - nitrosodietilamina (NDEA) em comparação com as enzimas humanas, arriscando falsos negativos.
- Detecção de espectro de mutação limitada:
As cepas padrão (por exemplo, TA98, TA100) detectam apenas tipos de mutação específicos (deslocamentos de quadros, substituições de base - pares), falta de clastogênios ou carcinógenos epigenéticos.
- Sobre - Reliance em sistemas bacterianos:
Como o teste utiliza Salmonella typhimurium, ele não explica os mecanismos de reparo de DNA presentes nas células de mamíferos, potencialmente ausentes de alguns efeitos mutagênicos.
- Falsos positivos e negativos:
Alguns compostos não - mutagênicos podem produzir resultados positivos devido a respostas ao estresse bacteriano, enquanto alguns mutagênicos que requerem ativação metabólica complexa podem não ser detectados.
O teste de Ames aprimorado
As perguntas e perguntas e respostas à liberação mais recentes da EMA afirmam que, devido à baixa sensibilidade de algumas nitrosaminas (por exemplo, NDMA) nas condições do teste de Ames padrão, recomenda -se as condições do teste AMES aprimorado fornecido pelo Centro Nacional de Pesquisa Toxicológica (NCTR) da FDA. O FDA concluiu que os métodos padrão utilizados para o teste AMES podem não ser suficientes para caracterizar o potencial mutagênico das nitrosaminas e, em alguns casos, pode produzir resultados negativos para nitrosaminas mutagênicas conhecidas. Em resposta, o Centro Nacional de Pesquisa Toxicológica da FDA vem testando diferentes condições para desenvolver o teste de Ames aprimorado, que se destina a fornecer uma avaliação mais confiável do potencial mutagênico das impurezas de nitrosamina.
As seguintes condições de teste de amos aprimorado (EAT) são fornecidas pelo FDA
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Cepas de teste |
Inclui Salmonella Typhimurium TA98, TA100. TA1535, TA1537 e Escherichia coli WP2 UVRA (PKM101) TRIMENTO DE TESTE |
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Método de teste e tempo de isolamento |
Os métodos pré -- isolamento e não - |
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Tipo S9 e concentração |
O teste AMES Enhanced deve ser realizado na contenção de 30% de fígado de rato S9 e 30%Hamster fígado S9. Os sobrenadantes desmossomais de rato e hamster (S9s) devem ser preparados a partir de fígados de roedores tratados comEnzima do citocromo P450- Indução de substâncias (por exemplo, uma combinação de fenobarbital e β - nafthoflavona). |
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Controle negativo (solvente/excipiente) |
Os solventes utilizados devem ser compatíveis com o teste de Ames de acordo comOCDE 471diretrizes. Os solventes disponíveis incluem, mas não estão limitados a: (1) água; (2) solventes orgânicos como acetonitrila, metanol e dimetilsulfóxido (DMSO). Quando os solventes orgânicos são usados, o menor volume possível na mistura pré -- Holding deve ser usado e deve -se demonstrar que a quantidade de solvente orgânico utilizado não interfere na ativação metabólica de nitrosaminas. |
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Controle positivo |
De acordo com as diretrizes da OCDE 471, a tensão - controles positivos específicos devem ser realizados ao mesmo tempo. Na presença de S9, as duas nitrosaminas conhecidas por serem mutagênicas também devem ser usadas como controles positivos. Os controles positivos para n - nitrosamina disponíveis incluem: ndma, 1 - ciclopentil - 4 - nitrosopiperrazina nsris。 |
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Todas as outras recomendações sobre a determinação de Ames devem seguir as diretrizes da OCDE 471 |
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Vantagem única da fração do fígado de hamster
A fração S9 do fígado de hamster é particularmente valiosa nos testes de Ames devido à sua capacidade superior de ativar certas nitrosaminas em comparação com o fígado de rato S9. Ele compartilha um perfil metabólico mais próximo das enzimas hepáticas humanas, tornando -o mais relevante para a avaliação de risco humano. Além disso, o fígado de hamster S9 contém níveis mais altos de enzimas específicas do citocromo P450, que são cruciais para a bioativação de mutagênicos. Isso resulta em maior sensibilidade e redução de taxas falsas - negativas, permitindo uma melhor detecção de mutagênicos que, de outra forma, podem não ser detectados apenas com o fígado de rato S9.
Conclusão
Embora o teste de Ames padrão continue sendo uma ferramenta fundamental para avaliar a mutagenicidade, suas limitações exigem melhorias para melhor precisão. O teste AMES aprimorado, particularmente com a inclusão da fração S9 do fígado de hamster, aumenta significativamente a detecção de mutagênicos complexos como nitrosaminas nitrosaminas, em ponte a lacuna entre o metabolismo bacteriano e de mamíferos. Esse avanço fornece um método mais confiável para avaliar potenciais carcinógenos humanos e apoia uma melhor decisão regulatória -
Palavras -chave: n - nitrosaminas, nsris, OCDE 471, teste de amos aprimorado, hamster fígado S9, enzimas citocromo p450, teste de mutação
Hora da postagem: 2025 - 03 - 12 09:22:09