Стандартный тест Эймса
Тест Ames является широко используемым анализом для обнаружения мутагенного потенциала в химических соединениях, включая N - Нитрозамины. Несмотря на его значение в токсикологическом скринингу, стандартный тест Ames имеет несколько ограничений, особенно при оценке соединений, требующих сложной метаболической активации.
Ограничения стандартного теста Эймса
Хотя тест Эймса остается краеугольным камнем в тестировании мутагенности, он имеет определенные ограничения:
- Ограниченная метаболическая активация:
В стандартном тесте Ames обычно используется печень крысы S9, в котором отсутствуют определенные ферменты человека - соответствующие цитохром P450 (CYP). Это может привести к независимости прокарциногенов (например, некоторых N - нитрозаминов) или чрезмерной активации не - человеческих опасностей. Пример: крыса S9 плохо метаболизирует N - Нитрозодиэтиламин (NDEA) по сравнению с человеческими ферментами, рискуя ложными негативами.
- Ограниченное обнаружение спектра мутации:
Стандартные штаммы (например, TA98, TA100) обнаруживают только специфические типы мутаций (FrameShifts, основание - Пары замены), отсутствующие кластогены или эпигенетические канцерогены.
- Над - зависимость от бактериальных систем:
Поскольку в тесте используется сальмонелла тифимурий, он не учитывает механизмы репарации ДНК, присутствующие в клетках млекопитающих, потенциально пропуская некоторые мутагенные эффекты.
- Ложные положительные и негативы:
Некоторые не - мутагенные соединения могут дать положительные результаты из -за реакций бактериального стресса, в то время как некоторые мутагены, требующие сложной метаболической активации, могут оставаться незамеченными.
Тест Enhanced Ames
В последнем руководстве EMA Q & As утверждается, что из -за низкой чувствительности некоторых N - Нитрозаминов (например, NDMA) в условиях теста стандартного AMES рекомендуется условия расширенного теста AMES, предоставленных Национальным центром токсикологических исследований FDA (NCTR). FDA пришел к выводу, что стандартные методы, используемые для теста AMES, могут быть недостаточными для характеристики мутагенного потенциала N - Нитрозаминов, а в некоторых случаях могут дать отрицательные результаты для известных мутагенных нитрозаминов. В ответ национальный центр токсикологических исследований FDA проверял различные условия для разработки теста AMES, который предназначен для обеспечения более надежной оценки мутагенного потенциала примесей N - Нитрозамина.
Следующие условия теста Enhanced Ames (EAT) предоставляются FDA
|
Тестовые штаммы |
Включает Salmonella typhimurium ta98, ta100. TA1535, TA1537 и Escherichia coli Тестовая штамм WP2 UVRA (PKM101) |
|
Метод испытаний и время изоляции |
Должны использоваться предварительно изоляция и не - |
|
Тип S9 и концентрация |
Усовершенствованный тест Ames должен быть выполнен при содержании 30% печени крысы S9 и 30%Печень хомяка S9Полем Десмосомальные супернатанты крысы и хомяка (S9S) должны быть приготовлены из печени грызунов, обработанныхЦитохром P450 фермент- индуцирующие вещества (например, комбинация фенобарбитала и β - нафтофлавон). |
|
Отрицательный (растворитель/эксципиент) контроль |
Используемые растворители должны быть совместимы с тестом Ames в соответствии сОЭСР 471Руководящие принципы. Доступные растворители включают, но не ограничиваются: (1) вода; (2) органические растворители, такие как ацетонитрил, метанол и диметилсульфоксид (ДМСО). Когда используются органические растворители, следует использовать наименьший объем в смеси предварительного удержания, и следует продемонстрировать, что количество используемого органического растворителя не мешает метаболической активации N - Нитрозаминов. |
|
Положительный контроль |
Согласно рекомендациям OECD 471, деформация - Конкретный положительный контроль должен выполняться одновременно. В присутствии S9 два N - Нитрозамина, известные как мутагенные, также должны использоваться в качестве положительного контроля. Доступны n - Нитрозаминовые положительные контроли включают в себя: ndma, 1 - Циклопентил - 4 - Нитросопиперазин Ndsris。 |
|
Все остальные рекомендации по определению Эймса должны следовать руководящим принципам ОЭСР 471 |
|
Уникальное преимущество фракции печени хомяка S9
Фракция печени печени хомяка особенно ценна в тестировании Эймса из -за его превосходной способности активировать определенные N - Нитрозамины по сравнению с S9 печени крысы. Он имеет более близкий метаболический профиль для ферментов печени человека, что делает его более актуальным для оценки риска человека. Кроме того, печень Hamster S9 содержит более высокие уровни специфических ферментов цитохрома P450, которые имеют решающее значение для биоактивации мутагенов. Это приводит к улучшению чувствительности и снижению ложных показателей, что позволяет лучше обнаружить мутагены, которые в противном случае могут оставаться незамеченными только с S9 печени крысы.
Заключение
Хотя стандартный тест Ames остается фундаментальным инструментом для оценки мутагенности, его ограничения требуют улучшения для лучшей точности. Усиленный тест Ames, особенно с включением фракции S9 печени хомяка, значительно усиливает обнаружение сложных мутагенов, таких как N - Нитрозамины, преодолевая пробел между бактериальным и метаболизмом млекопитающих. Это продвижение обеспечивает более надежный метод для оценки потенциальных человеческих канцерогенов и поддерживает лучшие регулирующие решения - Создание.
Ключевые слова: N - Нитрозамины, NDSRIS, OECD 471, Enhanced Ames Test, печень Hamster S9, ферменты цитохрома P450, тест на мутации
Время публикации: 2025 - 03 - 12 09:22:09