Testi i përmirësuar i Ames

Testi standard i ames

Testi Ames është një analizë e përdorur gjerësisht për zbulimin e potencialit mutagjenik në komponimet kimike, përfshirë N - nitrosamines. Megjithë rëndësinë e tij në shqyrtimin toksikologjik, testi standard AMES ka disa kufizime, veçanërisht kur vlerëson komponimet që kërkojnë aktivizim kompleks metabolik.

Kufizimet e testit standard AMES

Ndërsa testi Ames mbetet një gur themeli në testimin e mutagjenit, ai ka kufizime të caktuara:

• Aktivizimi i kufizuar metabolik:

Testi standard AMES zakonisht përdor mëlçinë e miut S9, të cilit i mungon disa enzima të caktuara njerëzore - citokromi përkatës P450 (CYP). Kjo mund të çojë në pasaktivizimin e procarcinogjenëve (p.sh., disa n - nitrosamina) ose mbivlerësimi i rreziqeve jo - njerëzore. Shembull: Rat S9 metabolizon dobët N - nitrosodietilaminë (NDEA) në krahasim me enzimat njerëzore, duke rrezikuar negativët e rremë.

• Zbulimi i kufizuar i spektrit të mutacionit:

Shtamet standarde (p.sh., TA98, TA100) zbulojnë vetëm llojet specifike të mutacionit (ndërlidhjet e kornizave, bazën - zëvendësimet e çiftit), klasogjenët që mungojnë ose kancerogjenët epigjenetikë.

• Mbi - Mbështetja në sistemet bakteriale:

Meqenëse testi përdor Salmonella typhimurium, ai nuk përbën mekanizmat e riparimit të ADN -së të pranishëm në qelizat e gjitarëve, duke humbur potencialisht disa efekte mutagjene.

• Pozitive dhe negativë false:

Disa komponime jo - mutagjene mund të japin rezultate pozitive për shkak të përgjigjeve të stresit bakterial, ndërsa disa mutagjene që kërkojnë aktivizim kompleks metabolik mund të mos zbulohen.

Testi i përmirësuar Ames

Lëshimi i fundit i EMA Q & As Udhëzimi thotë se për shkak të ndjeshmërisë së ulët të disa N - nitrosamines (p.sh., NDMA) në kushtet e testit standard të AMES, rekomandohen kushtet e testit të përmirësuar AMES të siguruar nga Qendra Kombëtare e FDA për Kërkime Toksikologjike (NCTR). FDA ka arritur në përfundimin se metodat standarde të përdorura për testin AMES mund të mos jenë të mjaftueshme për të karakterizuar potencialin mutagjenik të N - nitrosamines, dhe në disa raste mund të prodhojnë rezultate negative për nitrosamines mutagjene të njohura. Si përgjigje, Qendra Kombëtare e FDA -së për Kërkime Toksikologjike ka qenë duke testuar kushte të ndryshme për të zhvilluar testin e përmirësuar AMES, i cili ka për qëllim të sigurojë një vlerësim më të besueshëm të potencialit mutagjenik të papastërtive N - nitrosamine.

Kushtet e mëposhtme të testit të përmirësuar të Ames (EAT) sigurohen nga FDA

Avantazh unik i fraksionit të brejtësit të mëlçisë S9

Fraksioni i mëlçisë së brejtësit S9 është veçanërisht i vlefshëm në testimin e Ames për shkak të aftësisë së tij superiore për të aktivizuar disa n - nitrosamines në krahasim me mëlçinë e miut S9. Ajo ndan një profil më të ngushtë metabolik për enzimat e mëlçisë njerëzore, duke e bërë atë më të rëndësishme për vlerësimin e rrezikut njerëzor. Për më tepër, mëlçia e brejtësit S9 përmban nivele më të larta të enzimave specifike të citokromit P450, të cilat janë thelbësore për bioaktivizimin e mutagjeneve. Kjo rezulton në ndjeshmëri të përmirësuar dhe ulje të niveleve të rreme - negative, duke lejuar zbulimin më të mirë të mutagjeneve që përndryshe mund të shkojnë të pazbuluara vetëm me mëlçinë e miut S9 vetëm.

Përfundim

Ndërsa testi standard i Ames mbetet një mjet themelor për vlerësimin e mutagjenitetit, kufizimet e tij kërkojnë përmirësime për saktësi më të mirë. Testi i përmirësuar i Ames, veçanërisht me përfshirjen e fraksionit të mëlçisë S9 të brejtësit, rrit ndjeshëm zbulimin e mutagjeneve komplekse si n - nitrosamines, duke tejkaluar hendekun midis metabolizmit bakterial dhe gjitarëve. Kjo përparim siguron një metodë më të besueshme për vlerësimin e kancerogjenëve të mundshëm të njeriut dhe mbështet një vendim rregullator më të mirë - Marrja.

Fjalë kyçe: N - Nitrosamines, NDSRIS, OECD 471, Testi i Zgjeruar AMES, Hamster Mëlçia S9, Enzimat e Citokromit P450, Testi i Mutacionit