Standard AMES -test
AMES -testet är en allmänt utnyttjad analys för att detektera mutagenpotential i kemiska föreningar, inklusive Nitrosaminer. Trots dess betydelse i toxikologisk screening har standard AMES -testet flera begränsningar, särskilt vid utvärdering av föreningar som kräver komplex metabolisk aktivering.
Begränsningar av standard AMES -testet
Medan AMES -testet förblir en hörnsten i mutagenicitetstest, har det vissa begränsningar:
- Begränsad metabolisk aktivering:
Standard AMES -testet använder vanligtvis Rat Liver S9, som saknar vissa humana - relevanta cytokrom P450 (CYP) enzymer. Detta kan leda till underaktivering av procarcinogener (t.ex. vissa n - nitrosaminer) eller överaktivering av icke -mänskliga faror. Exempel: Rått S9 metaboliserar dåligt N - nitrosodietylamin (NDEA) jämfört med humana enzymer, vilket riskerar falska negativ.
- Begränsad mutationspektrumdetektering:
Standardstammar (t.ex. TA98, TA100) detekterar endast specifika mutationstyper (rameshifts, bas - Parersubstitutioner), saknade klastogener eller epigenetiska cancerframkallande ämnen.
- Över - Förtro till bakteriesystem:
Eftersom testet använder Salmonella typhimurium står det inte för DNA -reparationsmekanismer som finns i däggdjursceller, vilket potentiellt saknas vissa mutagena effekter.
- Falska positiva och negativa:
Vissa icke -mutagena föreningar kan ge positiva resultat på grund av bakteriespänningssvar, medan vissa mutagener som kräver komplex metabolisk aktivering kan bli oupptäckt.
Det förbättrade ames -testet
EMA: s senaste frisättning Q & AS -vägledning säger att på grund av den låga känsligheten för vissa Nitrosaminer (t.ex. NDMA) under villkoren för standard AMES -testet rekommenderas villkoren för det förbättrade AMES -testet som tillhandahålls av FDA: s National Center for Toxicological Research (NCTR). FDA har kommit fram till att de standardmetoder som används för AMES -testet kanske inte är tillräckliga för att karakterisera den mutagena potentialen för Nitrosaminer, och i vissa fall kan det ge negativa resultat för kända mutagena nitrosaminer. Som svar har FDA: s nationella centrum för toxikologisk forskning testat olika förhållanden för att utveckla det förbättrade AMES -testet, vilket är avsett att ge en mer tillförlitlig bedömning av den mutagena potentialen för Nitrosaminföroreningar.
Följande förbättrade ames -test (EAT) villkor tillhandahålls av FDA
|
Teststammar |
Inkluderar Salmonella Typhimurium TA98, TA100. TA1535, TA1537 och Escherichia coli WP2 UVRA (PKM101) teststam |
|
Testmetod och pre - isoleringstid |
PRE - Isolering och icke -plattbäddsmetoder bör användas, med en rekommenderad pre - isoleringstid på 30 minuter. |
|
S9 Typ och koncentration |
Det förbättrade AMES -testet bör utföras i innehållande 30% Rat Liver S9 och 30%Hamsterlever S9. Råtta och hamster desmosomala supernatanter (S9s) bör beredas från gnagare som behandlas medcytokrom P450 -enzym- inducerande ämnen (t.ex. en kombination av fenobarbital och p - naftoflavon). |
|
Negativ (lösningsmedel/hjälpande) kontroll |
De använda lösningsmedlen bör vara kompatibla med AMES -testet enligtOECD 471Riktlinjer. Tillgängliga lösningsmedel inkluderar, men är inte begränsade till: (1) vatten; (2) Organiska lösningsmedel såsom acetonitril, metanol och dimetylsulfoxid (DMSO). När organiska lösningsmedel används bör den lägsta möjliga volymen i förhandsblandningen användas och det bör demonstreras att mängden organiskt lösningsmedel som används inte stör den metaboliska aktiveringen av Nitrosaminer. |
|
Positiv kontroll |
Enligt OECD 471 riktlinjer bör stam - specifika positiva kontroller utföras samtidigt. I närvaro av S9 bör de två nitrosaminerna som är kända för att vara mutagena också användas som positiva kontroller. Tillgänglig N - Nitrosamin Positiva kontroller inkluderar: NDMA, 1 - Cyklopentyl - 4 - Nitrosopiperazin NDSRIS。 |
|
Alla andra rekommendationer om AMES -bestämning bör följa OECD 471 riktlinjer |
|
Unik fördel med hamsterlever S9 -fraktion
Hamsterlever S9 -fraktion är särskilt värdefull i AMES -testning på grund av dess överlägsna förmåga att aktivera vissa Nitrosaminer jämfört med Rat Liver S9. Den delar en närmare metabolisk profil till mänskliga leverenzymer, vilket gör den mer relevant för mänsklig riskbedömning. Dessutom innehåller hamsterlever S9 högre nivåer av specifika cytokrom P450 -enzymer, som är avgörande för bioaktivering av mutagener. Detta resulterar i förbättrad känslighet och minskade falska - negativa hastigheter, vilket möjliggör bättre upptäckt av mutagener som annars kan gå oupptäckt med råttlever S9 ensam.
Slutsats
Medan standard AMES -testet förblir ett grundläggande verktyg för att bedöma mutagenicitet, kräver dess begränsningar förbättringar för bättre noggrannhet. Det förbättrade AMES -testet, särskilt med införandet av hamsterlever S9 -fraktion, förbättrar signifikant detekteringen av komplexa mutagener som N - nitrosaminer, och överbryggar klyftan mellan bakteriell och däggdjursmetabolism. Detta framsteg ger en mer tillförlitlig metod för att utvärdera potentiella mänskliga cancerframkallande ämnen och stöder bättre beslut om lagstiftning.
Nyckelord: N - Nitrosaminer, NDSRI, OECD 471, Enhanced Ames Test, Hamster Liver S9, Cytochrome P450 enzymer, mutationstest
Inläggstid: 2025 - 03 - 12 09:22:09