Standard Ames Test
Ang pagsubok ng AMES ay isang malawak na ginamit na assay para sa pagtuklas ng mga potensyal na mutagenic sa mga compound ng kemikal, kabilang ang n - nitrosamines. Sa kabila ng kabuluhan nito sa nakakalason na screening, ang karaniwang pagsubok ng AMES ay may ilang mga limitasyon, lalo na kapag sinusuri ang mga compound na nangangailangan ng kumplikadong pag -activate ng metabolic.
Mga limitasyon ng karaniwang pagsubok ng AMES
Habang ang pagsubok ng Ames ay nananatiling isang pundasyon sa pagsubok ng mutagenicity, mayroon itong ilang mga limitasyon:
- Limitadong Metabolic activation:
Ang karaniwang pagsubok ng AMES ay karaniwang gumagamit ng daga ng atay S9, na kulang sa ilang tao - may kaugnayan na cytochrome P450 (CYP) enzymes. Maaari itong humantong sa hindi pag -uugali ng mga procarcinogens (hal., Ilang n - nitrosamines) o labis na pag -uugali ng mga panganib sa tao. Halimbawa: Rat S9 hindi maganda ang metabolize n - nitrosodiethylamine (NDEA) kumpara sa mga enzyme ng tao, nanganganib na mga maling negatibo.
- Limitadong Mutation Spectrum Detection:
Ang mga karaniwang strain (hal., TA98, TA100) ay nakakakita lamang ng mga tiyak na uri ng mutation (frameshift, base - mga kapalit na pares), nawawalang mga clastogens o epigenetic carcinogens.
- Higit sa - pag -asa sa mga sistemang bakterya:
Dahil ang pagsubok ay gumagamit ng Salmonella typhimurium, hindi ito account para sa mga mekanismo ng pag -aayos ng DNA na naroroon sa mga selula ng mammalian, na potensyal na nawawala ang ilang mga mutagenic effects.
- Maling positibo at negatibo:
Ang ilang mga non - mutagenic compound ay maaaring magbunga ng mga positibong resulta dahil sa mga tugon ng stress ng bakterya, habang ang ilang mga mutagens na nangangailangan ng kumplikadong metabolic activation ay maaaring hindi mapapansin.
Ang pinahusay na pagsubok ng AMES
Ang pinakabagong paglabas ng EMA ng Q&S AS ay nagsasaad na dahil sa mababang pagiging sensitibo ng ilang N - nitrosamines (e.g., NDMA) sa ilalim ng mga kondisyon ng karaniwang pagsubok ng AMES, inirerekomenda ang mga kondisyon ng pinahusay na pagsubok ng AMES na ibinigay ng National Center for Toxicological Research (NCTR). Napagpasyahan ng FDA na ang mga pamantayang pamamaraan na ginamit para sa pagsubok ng AMES ay maaaring hindi sapat upang makilala ang potensyal na mutagenic ng N - nitrosamines, at sa ilang mga kaso ay maaaring makagawa ng mga negatibong resulta para sa kilalang mutagenic nitrosamines. Bilang tugon, ang National Center para sa Toxicological Research ng FDA ay sumusubok sa iba't ibang mga kondisyon upang mabuo ang pinahusay na pagsubok ng AMES, na inilaan upang magbigay ng isang mas maaasahang pagtatasa ng potensyal na mutagenic ng N - nitrosamine impurities.
Ang sumusunod na pinahusay na mga kondisyon ng Ames test (EAT) ay ibinibigay ng FDA
|
Mga pagsubok sa pagsubok |
May kasamang Salmonella typhimurium TA98, TA100. TA1535, TA1537 at Escherichia coli WP2 UVRA (PKM101) Pagsubok ng Strain |
|
Paraan ng Pagsubok at Pre - Oras ng pagkakabukod |
Pre - pagkakabukod at hindi - flatbedding na pamamaraan ay dapat gamitin, na may inirekumendang pre - oras ng pagkakabukod ng 30 minuto. |
|
Uri ng S9 at konsentrasyon |
Ang pinahusay na pagsubok ng AMES ay dapat isagawa sa naglalaman ng 30% na daga ng atay S9 at 30%Hamster Liver S9. Rat and hamster desmosomal supernatants (S9s) should be prepared from rodent livers treated withCytochrome P450 enzyme- nakakaakit na mga sangkap (hal., Isang kumbinasyon ng phenobarbital at β - naphthoflavone). |
|
Negatibo (solvent/excipient) control |
Ang mga solvent na ginamit ay dapat na katugma sa pagsubok ng AMES ayon saOECD 471Mga Alituntunin. Ang mga magagamit na solvent ay kasama, ngunit hindi limitado sa: (1) tubig; (2) mga organikong solvent tulad ng acetonitrile, methanol, at dimethyl sulfoxide (DMSO). Kapag ginagamit ang mga organikong solvent, ang pinakamababang posibleng dami sa pre - hawak na halo ay dapat gamitin at dapat itong ipakita na ang halaga ng organikong solvent na ginamit ay hindi makagambala sa metabolic activation ng n - nitrosamines. |
|
Positibong kontrol |
Ayon sa mga patnubay ng OECD 471, ang mga tiyak na positibong kontrol ay dapat isagawa nang sabay. Sa pagkakaroon ng S9, ang dalawang n - nitrosamines na kilala na mutagenic ay dapat ding gamitin bilang mga positibong kontrol. Magagamit na n - Nitrosamine Positibong Mga Kontrol ay kinabibilangan ng: NDMA, 1 - Cyclopentyl - 4 - Nitrosopiperazine NDSris。 |
|
Ang lahat ng iba pang mga rekomendasyon sa pagpapasiya ng AMES ay dapat sundin ang mga patnubay sa OECD 471 |
|
Natatanging bentahe ng hamster atay S9 na bahagi
Ang bahagi ng Hamster Liver S9 ay partikular na mahalaga sa pagsubok ng AMES dahil sa higit na kakayahang maisaaktibo ang ilang mga n - nitrosamines kumpara sa daga ng atay S9. Nagbabahagi ito ng isang mas malapit na metabolic profile sa mga enzyme ng atay ng tao, na ginagawang mas may kaugnayan para sa pagtatasa ng peligro ng tao. Bilang karagdagan, ang hamster atay S9 ay naglalaman ng mas mataas na antas ng mga tiyak na cytochrome P450 enzymes, na mahalaga para sa bioactivation ng mutagens. Nagreresulta ito sa pinahusay na sensitivity at nabawasan ang maling - negatibong mga rate, na nagpapahintulot sa mas mahusay na pagtuklas ng mga mutagens na maaaring kung hindi man ay hindi natukoy sa daga ng atay S9 lamang.
Konklusyon
Habang ang karaniwang pagsubok ng AMES ay nananatiling isang pangunahing tool para sa pagtatasa ng mutagenicity, ang mga limitasyon nito ay nangangailangan ng mga pagpapabuti para sa mas mahusay na kawastuhan. Ang pinahusay na pagsubok ng AMES, lalo na sa pagsasama ng hamster atay S9 na bahagi, makabuluhang nagpapabuti sa pagtuklas ng mga kumplikadong mutagens tulad ng n - nitrosamines, pag -bridging ng agwat sa pagitan ng metabolismo ng bakterya at mammalian. Ang pagsulong na ito ay nagbibigay ng isang mas maaasahang pamamaraan para sa pagsusuri ng mga potensyal na carcinogens ng tao at sumusuporta sa mas mahusay na pagpapasya sa regulasyon - paggawa.
Mga keyword: n - nitrosamines, ndsris, OECD 471, pinahusay na pagsubok ng ames, hamster atay S9, cytochrome P450 enzymes, mutation test
Oras ng Mag -post: 2025 - 03 - 12 09:22:09