Standart Ames Testi
Ames testi, N - nitrosaminler dahil kimyasal bileşiklerde mutajenik potansiyelin saptanması için yaygın olarak kullanılan bir testtir. Toksikolojik taramadaki önemine rağmen, standart Ames testi, özellikle karmaşık metabolik aktivasyon gerektiren bileşikleri değerlendirirken çeşitli sınırlamalara sahiptir.
Standart Ames testinin sınırlamaları
Ames testi mutajenite testinde bir temel taşı olarak kalırken, belirli sınırlamaları vardır:
- Sınırlı metabolik aktivasyon:
Standart Ames testi tipik olarak belirli insan - ilgili sitokrom P450 (CYP) enzimlerinden yoksun olan sıçan karaciğeri S9 kullanır. Bu, prokarsinojenlerin (örn. Bazı N - nitrosaminler) yetersiz aktivasyonuna veya insan tehlikelerinin aşırı aktivasyonuna yol açabilir. Örnek: Sıçan S9, insan enzimlerine kıyasla n - nitrosodiyetilamin (NDEA) zayıf metabolize ederek yanlış negatifleri riske atar.
- Sınırlı mutasyon spektrumu tespiti:
Standart suşlar (örn., TA98, TA100) sadece spesifik mutasyon tiplerini (çerçeve kaymaları, baz - çift ikameleri), eksik klastojenleri veya epigenetik karsinojenleri tespit eder.
- Aşırı - Bakteriyel Sistemlere Güven:
Test Salmonella typhimurium kullandığından, memeli hücrelerinde bulunan DNA onarım mekanizmalarını hesaba katmaz, potansiyel olarak bazı mutajenik etkiler eksiktir.
- Yanlış pozitifler ve negatifler:
Bazı mutajenik bileşikler bakteriyel stres tepkileri nedeniyle pozitif sonuçlar verebilirken, kompleks metabolik aktivasyon gerektiren bazı mutajenler tespit edilmeyebilir.
Gelişmiş Ames testi
EMA'nın son sürüm Soru -Cevapları, standart Ames testi koşulları altında bazı N - nitrosaminlerin (örn. NDMA) düşük hassasiyeti nedeniyle, FDA Ulusal Toksikolojik Araştırmalar Merkezi (NCTR) tarafından sağlanan gelişmiş Ames testinin koşullarının önerildiğini belirtmektedir. FDA, Ames testi için kullanılan standart yöntemlerin N - nitrosaminlerin mutajenik potansiyelini karakterize etmek için yeterli olmayabileceği ve bazı durumlarda bilinen mutajenik nitrozaminler için olumsuz sonuçlar üretebileceği sonucuna varmıştır. Buna karşılık, FDA'nın Ulusal Toksikolojik Araştırmalar Merkezi, N - nitrosamin safsızlıklarının mutajenik potansiyelinin daha güvenilir bir değerlendirmesini sağlamayı amaçlayan gelişmiş Ames testini geliştirmek için farklı koşulları test etmektedir.
FDA tarafından aşağıdaki gelişmiş Ames testi (EAT) koşulları sağlanmaktadır
|
Test suşları |
Salmonella Typhimurium TA98, TA100 içerir. TA1535, TA1537 ve Escherichia coli WP2 UVRA (PKM101) Test Suşu |
|
Test yöntemi ve ön - yalıtım süresi |
Önceden - Yalıtım ve Düz Yatma Yöntemleri, 30 dakikalık bir ön - yalıtım süresi ile kullanılmalıdır. |
|
S9 tipi ve konsantrasyonu |
Geliştirilmiş Ames testi,% 30 sıçan karaciğeri S9 ve% 30 içerisinde yapılmalıdırHamster karaciğer s9. Sıçan ve hamster desmozomal süpernatantlar (S9S)Sitokrom P450 enzimiMaddeleri indükleme (örn. Fenobarbital ve β - naftoflavonun bir kombinasyonu). |
|
Negatif (çözücü/eksipiyan) kontrol |
Kullanılan çözücüler, Ames testi ile uyumlu olmalıdır.OECD 471Yönergeler. Mevcut çözücüler aşağıdakileri içerir, ancak bunlarla sınırlı değildir: (1) su; (2) Asetonitril, metanol ve dimetil sülfoksit (DMSO) gibi organik çözücüler. Organik çözücüler kullanıldığında, ön - tutma karışımındaki mümkün olan en düşük hacim kullanılmalı ve kullanılan organik çözücü miktarının N - nitrosaminlerin metabolik aktivasyonuna müdahale etmediği gösterilmelidir. |
|
Pozitif Kontrol |
OECD 471 yönergelerine göre, gerinim - spesifik pozitif kontroller aynı anda yapılmalıdır. S9 varlığında, mutajenik olduğu bilinen iki N - nitrozamin de pozitif kontroller olarak kullanılmalıdır. Mevcut N - Nitrosamin Pozitif Kontroller: NDMA, 1 - Siklopentil - 4 - Nitrosopiperazin NDSRIS。 |
|
Ames tespiti ile ilgili diğer tüm öneriler OECD 471 yönergelerini izlemelidir |
|
Hamster karaciğerinin benzersiz avantajı S9 fraksiyonu
Hamster karaciğer S9 fraksiyonu, sıçan karaciğeri S9'a kıyasla belirli N - nitrosaminleri aktive etme üstün yeteneği nedeniyle Ames testinde özellikle değerlidir. İnsan karaciğer enzimlerine daha yakın bir metabolik profil paylaşıyor ve bu da onu insan risk değerlendirmesi ile daha alakalı hale getiriyor. Ek olarak, hamster karaciğeri S9, mutajenlerin biyoaktivasyonu için çok önemli olan daha yüksek seviyelerde spesifik sitokrom P450 enzimleri içerir. Bu, gelişmiş hassasiyet ve azaltılmış yanlış - negatif oranlar ile sonuçlanır ve sadece sıçan karaciğeri S9 ile tespit edilmeyebilecek mutajenlerin daha iyi tespit edilmesine izin verir.
Çözüm
Standart Ames testi mutajenikliği değerlendirmek için temel bir araç olmaya devam ederken, sınırlamaları daha iyi doğruluk için iyileştirmeler gerektirir. Geliştirilmiş Ames testi, özellikle hamster karaciğeri S9 fraksiyonunun dahil edilmesiyle, bakteriyel ve memeli metabolizması arasındaki boşluğu kapatarak N - nitrosaminler gibi karmaşık mutajenlerin saptanmasını önemli ölçüde arttırır. Bu ilerleme, potansiyel insan kanserojenlerini değerlendirmek için daha güvenilir bir yöntem sağlar ve daha iyi düzenleyici kararı destekler.
Anahtar Kelimeler: N - nitrosaminler, NDSRIS, OECD 471, Geliştirilmiş Ames Testi, Hamster Karaciğer S9, Sitokrom P450 Enzimler, Mutasyon Testi
Gönderme Zamanı: 2025 - 03 - 12 09:22:09