Стандартний тест Емеса
Тест Емеса - це широко використаний аналіз для виявлення мутагенного потенціалу в хімічних сполуках, включаючи n - нітрозаміни. Незважаючи на його значення в токсикологічному скринінгу, стандартний тест Емеса має кілька обмежень, особливо при оцінці сполук, що потребують складної метаболічної активації.
Обмеження стандартного тесту Емеса
Хоча тест Емеса залишається наріжним каменем при тестуванні мутагенності, він має певні обмеження:
- Обмежена метаболічна активація:
Стандартний тест Емеса, як правило, використовує печінку щурів S9, в якому не вистачає певних ферментів людського - відповідного цитохрому P450 (CYP). Це може призвести до недооцінки прокарциногенів (наприклад, деяких n - нітрозамінів) або надмірної активації небезпек людини. Приклад: щур S9 погано метаболізує n - нітросодіетиламін (ndea) порівняно з ферментами людини, ризикуючи помилковими негативами.
- Обмежене виявлення спектру мутації:
Стандартні штами (наприклад, TA98, TA100) Виявляють лише специфічні типи мутації (фрейміза, основа - заміни пари), відсутні кластогени або епігенетичні канцерогени.
- Над - опора на бактеріальні системи:
Оскільки у тесті використовується тифімурій сальмонели, він не враховує механізми відновлення ДНК, присутні в клітинах ссавців, потенційно не вистачає деяких мутагенних ефектів.
- Помилкові позитиви та негативи:
Деякі не - мутагенні сполуки можуть дати позитивні результати через реакції на бактеріальний стрес, тоді як деякі мутагени, що потребують складної метаболічної активації, можуть залишатися непоміченими.
Посилений тест Емеса
Останній випуск EMA Q & як вказівки зазначають, що через низьку чутливість деяких N - нітрозамінів (наприклад, NDMA) за умов стандартного тесту Емеса рекомендується вдосконалені тестування AMES, передбачені Національним центром токсикологічних досліджень FDA (NCTR). FDA дійшов висновку, що стандартні методи, що використовуються для тесту Емеса, можуть бути недостатніми для характеристики мутагенного потенціалу N - нітрозамінів, а в деяких випадках може призвести до негативних результатів для відомих мутагенних нітрозамінів. У відповідь Національний центр токсикологічних досліджень FDA проводить тестування різних умов для розробки тесту на посилену AMES, який має на меті забезпечити більш надійну оцінку мутагенного потенціалу N - нітрозамінових домішок.
Наступні вдосконалені умови тесту AMES (EAT) забезпечуються FDA
|
Тестові штами |
Включає сальмонелу Typhimurium TA98, TA100. TA1535, TA1537 та Escherichia coli Тестовий штам WP2 UVRA (PKM101) |
|
Метод тестування та час ізоляції |
Необхідно застосовувати методи ізоляції та не - плоскокветювання з рекомендованим попереднім часом ізоляції 30 хвилин. |
|
Тип S9 та концентрація |
Покращений тест Емеса слід проводити при складанні 30% печінки щурів S9 та 30%Хом'як печінки S9. Десмосомні супернатанти щурів та хом'яків (S9) слід готувати з печінки гризунів, оброблених зфермент цитохрому P450- індукування речовин (наприклад, комбінація фенобарбіталу та β - нафтофлавон). |
|
Негативний (розчинник/допоміжний) контроль |
Використовувані розчинники повинні бути сумісні з тестом Еймса відповідно доOECD 471керівні принципи. Доступні розчинники включають, але не обмежуються ними: (1) вода; (2) Органічні розчинники, такі як ацетонітрил, метанол та диметилсульфоксид (DMSO). Коли використовуються органічні розчинники, слід використовувати найнижчий можливий об'єм у суміші, що тримається перед - |
|
Позитивний контроль |
Відповідно до вказівок OECD 471, штам - специфічний позитивний контроль слід виконувати одночасно. У присутності S9 два N - нітрозаміни, як відомо, мутагеннічні також повинні використовуватися як позитивні контролі. Доступний N - Нітросамін Позитивний контроль включає: NDMA, 1 - Циклопентил - 4 - Nitrosopiperazine ndsris。 |
|
Усі інші рекомендації щодо визначення AMES повинні дотримуватися керівних принципів OECD 471 |
|
Унікальна перевага фракції печінки хом'яка S9
Фракція печінки хом'яка S9 особливо цінна в тестуванні Еймса завдяки своїй чудовій здатності активувати певні N - нітрозаміни порівняно з печінкою щурів S9. Він поділяє більш тісний метаболічний профіль для ферментів печінки людини, що робить його більш актуальним для оцінки ризику людини. Крім того, печінка хом'яка S9 містить більш високий рівень специфічних ферментів цитохрому Р450, які мають вирішальне значення для біоактивації мутагенів. Це призводить до підвищення чутливості та зниження помилкових - негативних швидкостей, що дозволяє краще виявити мутагени, які в іншому випадку можуть не виявитись лише печінкою щурів S9.
Висновок
Хоча стандартний тест Емеса залишається фундаментальним інструментом для оцінки мутагенності, його обмеження потребують покращення для кращої точності. Посилений тест Емеса, особливо при включенні фракції печінки хом'яка S9, значно посилює виявлення складних мутагенів, таких як N - нітрозаміни, що подорожують зазор між бактеріальним та метаболізмом ссавців. Цей прогрес забезпечує більш надійний метод оцінки потенційних канцерогенів людини та підтримує кращі регуляторні рішення.
Ключові слова: n - нітрозаміни, NDSRIS, OECD 471, Посилений тест Емеса, хом'як печінки S9, ферменти цитохрому P450, тест мутації
Час посади: 2025 - 03 - 12 09:22:09