Bài kiểm tra Ames nâng cao

Kiểm tra AMES tiêu chuẩn

Thử nghiệm AMES là một xét nghiệm được sử dụng rộng rãi để phát hiện tiềm năng gây đột biến trong các hợp chất hóa học, bao gồm N - Nitrosamines. Mặc dù có ý nghĩa trong sàng lọc độc tính, xét nghiệm AMES tiêu chuẩn có một số hạn chế, đặc biệt khi đánh giá các hợp chất yêu cầu kích hoạt trao đổi chất phức tạp.

Hạn chế của bài kiểm tra AMES tiêu chuẩn

Mặc dù xét nghiệm Ames vẫn là một nền tảng trong thử nghiệm gây đột biến, nhưng nó có những hạn chế nhất định:

• Kích hoạt trao đổi chất hạn chế:

Xét nghiệm AMES tiêu chuẩn thường sử dụng gan chuột S9, thiếu một số enzyme cytochrom p450 (CYP) có liên quan của con người. Điều này có thể dẫn đến không hoạt động của procarcinogens (ví dụ: một số n - nitrosamines) hoặc hoạt động quá mức của các mối nguy hiểm không phải là con người. Ví dụ: chuột S9 chuyển hóa kém N - Nitrosodiethylamine (NDEA) so với các enzyme của con người, có nguy cơ phủ định sai.

• Phát hiện phổ đột biến hạn chế:

Các chủng tiêu chuẩn (ví dụ, TA98, TA100) chỉ phát hiện các loại đột biến cụ thể (frameeshifts, cơ sở - thay thế cặp), thiếu clastogen hoặc chất gây ung thư biểu sinh.

• Trên - phụ thuộc vào các hệ thống vi khuẩn:

Vì thử nghiệm sử dụng salmonella typhimurium, nó không tính đến các cơ chế sửa chữa DNA có trong các tế bào động vật có vú, có khả năng thiếu một số tác động gây đột biến.

• Tích cực và tiêu cực giả:

Một số hợp chất không gây đột biến có thể mang lại kết quả dương tính do phản ứng căng thẳng của vi khuẩn, trong khi một số đột biến đòi hỏi phải kích hoạt trao đổi chất phức tạp có thể không bị phát hiện.

Bài kiểm tra Ames nâng cao

Hướng dẫn phát hành mới nhất của EMA theo hướng dẫn nói rằng do độ nhạy thấp của một số n - nitrosamines (ví dụ: NDMA) trong các điều kiện của xét nghiệm AMES tiêu chuẩn, các điều kiện của thử nghiệm AMES nâng cao được cung cấp bởi Trung tâm nghiên cứu độc tính quốc gia của FDA (NCTR). FDA đã kết luận rằng các phương pháp tiêu chuẩn được sử dụng cho xét nghiệm AMES có thể không đủ để mô tả tiềm năng gây đột biến của n - nitrosamine và trong một số trường hợp có thể tạo ra kết quả âm tính đối với nitrosamine gây đột biến đã biết. Đáp lại, Trung tâm nghiên cứu độc tính quốc gia của FDA đã thử nghiệm các điều kiện khác nhau để phát triển thử nghiệm AMES nâng cao, nhằm đưa ra đánh giá đáng tin cậy hơn về khả năng gây đột biến của tạp chất N - nitrosamine.

Các điều kiện thử nghiệm AMES (EAT) nâng cao sau đây được cung cấp bởi FDA

Ưu điểm duy nhất của phần gan Hamster S9

Phần S9 gan hamster đặc biệt có giá trị trong xét nghiệm AMES do khả năng vượt trội của nó để kích hoạt một số nitrosamine N - so với gan chuột S9. Nó chia sẻ một hồ sơ trao đổi chất gần hơn với các enzyme gan người, làm cho nó phù hợp hơn để đánh giá rủi ro của con người. Ngoài ra, gan Hamster S9 chứa mức độ cao hơn của các enzyme Cytochrom P450 cụ thể, rất quan trọng đối với hoạt động sinh học của đột biến. Điều này dẫn đến độ nhạy được cải thiện và giảm tỷ lệ giả - cho phép phát hiện tốt hơn các đột biến có thể không bị phát hiện với gan chuột S9.

Phần kết luận

Mặc dù thử nghiệm AMES tiêu chuẩn vẫn là một công cụ cơ bản để đánh giá tính gây đột biến, những hạn chế của nó đòi hỏi phải cải thiện độ chính xác tốt hơn. Thử nghiệm AMES nâng cao, đặc biệt là bao gồm phần S9 gan chuột đồng, giúp tăng cường đáng kể việc phát hiện các đột biến phức tạp như N - Nitrosamine, thu hẹp khoảng cách giữa chuyển hóa vi khuẩn và động vật có vú. Sự tiến bộ này cung cấp một phương pháp đáng tin cậy hơn để đánh giá các chất gây ung thư tiềm năng của con người và hỗ trợ quyết định điều tiết tốt hơn - Đưa ra.

Từ khóa: N - Nitrosamines, NDSRI, OECD 471, xét nghiệm AMES tăng cường, Gan Hamster S9, Cytochrom P450 enzyme