تست استاندارد آمس
آزمایش AMES یک روش مورد استفاده گسترده برای تشخیص پتانسیل جهش زا در ترکیبات شیمیایی از جمله N - نیتروسامین ها است. با وجود اهمیت آن در غربالگری سم شناسی ، آزمون استاندارد AMES محدودیت های مختلفی دارد ، به ویژه هنگام ارزیابی ترکیبات نیاز به فعال سازی متابولیک پیچیده.
محدودیت های آزمون استاندارد AMES
در حالی که تست AMES در آزمایش جهش زایی سنگ بنای سنگ بنای آن باقی مانده است ، محدودیت های خاصی دارد:
- فعال سازی متابولیک محدود:
آزمایش استاندارد AMES به طور معمول از کبد موش صحرایی S9 استفاده می کند ، که فاقد آنزیم های خاص انسانی - آنزیم های مرتبط با سیتوکروم P450 (CYP) است. این می تواند منجر به عدم فعال شدن پروكسینوژن ها (به عنوان مثال ، برخی از نیتروسامین ها) یا فعال سازی بیش از حد خطرات غیر انسانی شود. مثال: موش S9 ضعیف متابولیزه شده N - نیتروسودی اتیل آمین (NDEA) در مقایسه با آنزیم های انسانی ، خطر منفی کاذب را به خطر می اندازد.
- تشخیص طیف جهش محدود:
سویه های استاندارد (به عنوان مثال ، TA98 ، TA100) فقط انواع جهش خاص (فریم تغییر ، پایه - تعویض جفت) ، از دست رفته کلاستوژن ها یا سرطان زا اپی ژنتیکی را تشخیص می دهند.
- بیش از - اعتماد به سیستم های باکتریایی:
از آنجا که این آزمایش از Salmonella Typhimurium استفاده می کند ، مکانیسم های ترمیم DNA موجود در سلولهای پستانداران را به خود اختصاص نمی دهد ، به طور بالقوه برخی از اثرات جهش زا را از دست نمی دهد.
- مثبت و منفی کاذب:
برخی از ترکیبات غیر - جهش زا ممکن است به دلیل پاسخ به استرس باکتریایی نتایج مثبتی داشته باشند ، در حالی که برخی از جهش یافته هایی که نیاز به فعال سازی متابولیک پیچیده دارند ممکن است کشف نشده باشند.
تست پیشرفته آمس
آخرین نسخه نسخه پرسش و پاسخ EMA بیان می کند که با توجه به حساسیت کم برخی از نیتروسامین ها (به عنوان مثال ، NDMA) تحت شرایط آزمایش استاندارد AMES ، شرایط آزمایش AMES پیشرفته ارائه شده توسط مرکز ملی تحقیقات سم شناسی FDA (NCTR) توصیه می شود. FDA به این نتیجه رسیده است که روشهای استاندارد مورد استفاده برای آزمایش AMES ممکن است برای توصیف پتانسیل جهش زایی N - نیتروسامین ها کافی نباشد ، و در برخی موارد ممکن است نتایج منفی را برای نیتروسامین های جهش یافته شناخته شده تولید کند. در پاسخ ، مرکز ملی تحقیقات سم شناسی FDA در حال آزمایش شرایط مختلفی برای توسعه آزمایش AMES پیشرفته است ، که برای ارائه ارزیابی قابل اطمینان تر از پتانسیل جهش زا ناخالصی های N - نیتروسامین است.
شرایط تست آمس پیشرفته زیر (EAT) توسط FDA ارائه می شود
|
سویه های آزمایشی |
شامل سالمونلا Typhimurium TA98 ، TA100. TA1535 ، TA1537 و Escherichia coli WP2 UVRA (PKM101) فشار آزمایش |
|
روش آزمون و قبل از - زمان عایق |
قبل از - از روشهای عایق و غیر - تختخواب باید استفاده شود ، با مدت زمان 30 دقیقه عایق توصیه شده. |
|
نوع و غلظت S9 |
تست پیشرفته AMES باید در حاوی 30 ٪ کبد موش صحرایی S9 و 30 ٪ انجام شودکبد همستر S9بشر مایع رویی دسموزومی موش و همستر (S9s) باید از کبد جوندگان تحت درمان با آن تهیه شودآنزیم سیتوکروم P450- القاء مواد (به عنوان مثال ، ترکیبی از فنوباربیتال و β - نفتوفلوون). |
|
کنترل منفی (حلال/تحریک کننده) |
حلال های مورد استفاده باید مطابق با آزمایش AMES سازگار باشدOECD 471دستورالعمل ها حلال های موجود شامل ، اما محدود به: (1) آب ؛ (2) حلال های آلی مانند استونیتریل ، متانول و دی متیل سولفوکسید (DMSO). هنگامی که از حلال های آلی استفاده می شود ، از کمترین حجم ممکن در مخلوط قبل از نگه داشتن استفاده می شود و باید نشان داد که میزان حلال آلی مورد استفاده در فعال سازی متابولیک N - نیتروسامین ها دخالت نمی کند. |
|
کنترل مثبت |
مطابق دستورالعمل OECD 471 ، کرنش - کنترل های مثبت خاص باید در همان زمان انجام شود. در حضور S9 ، از دو n - نیتروسامین های شناخته شده به عنوان جهش زا نیز باید به عنوان کنترل مثبت استفاده شود. کنترل های مثبت نیتروسامین موجود در دسترس عبارتند از: NDMA ، 1 - سیکلوپنتیل - 4 - nitrosopiperazine ndsris |
|
تمام توصیه های دیگر در مورد تعیین AMES باید از دستورالعمل های OECD 471 پیروی کند |
|
مزیت منحصر به فرد کبد S9 همستر
کبد S9 کبد همستر به دلیل توانایی برتر در فعال کردن برخی از نیتروسامین ها در مقایسه با کبد موش S9 ، در آزمایش AMES به ویژه در آزمایش AMES بسیار ارزشمند است. این یک پروفایل متابولیک نزدیکتر با آنزیم های کبد انسان است و باعث می شود که آن را برای ارزیابی ریسک انسان مرتبط تر کند. علاوه بر این ، کبد همستر S9 حاوی مقادیر بالاتری از آنزیم های خاص سیتوکروم P450 است که برای فعال شدن زیستی جهش یافته بسیار مهم است. این منجر به بهبود حساسیت و کاهش نرخ منفی - می شود ، امکان تشخیص بهتر جهش یافته هایی را فراهم می کند که در غیر این صورت ممکن است به تنهایی با کبد موش صحرایی کشف نشود.
پایان
در حالی که آزمون استاندارد AMES ابزاری اساسی برای ارزیابی جهش زایی است ، محدودیت های آن نیاز به پیشرفت برای دقت بهتر دارد. آزمایش AMES پیشرفته ، به ویژه با درج کسر کبد همستر S9 ، به طور قابل توجهی تشخیص جهش یافته های پیچیده مانند N - نیتروسامین ها را افزایش می دهد و باعث ایجاد شکاف بین متابولیسم باکتریایی و پستانداران می شود. این پیشرفت یک روش مطمئن تر برای ارزیابی سرطان زا بالقوه انسانی را فراهم می کند و از تصمیم گیری بهتر نظارتی پشتیبانی می کند -
واژه‌های کلیدی: N - نیتروسامین ها ، ndsris ، OECD 471 ، تست آمس پیشرفته ، کبد همستر S9 ، آنزیم های سیتوکروم P450 ، آزمایش جهش
زمان پست: 2025 - 03 - 12 09:22:09