Test standard d'Ames standard
Le test Ames est un test largement utilisé pour détecter le potentiel mutagène dans les composés chimiques, y compris les n - nitrosamines. Malgré sa signification dans le dépistage toxicologique, le test AMES standard a plusieurs limites, en particulier lors de l'évaluation des composés nécessitant une activation métabolique complexe.
Limites du test AMES standard
Bien que le test Ames reste une pierre angulaire des tests de mutagénicité, il a certaines limites:
- Activation métabolique limitée:
Le test AMES standard utilise généralement le foie de rat S9, qui n'a pas certaines enzymes humaines - Cytochrome P450 (CYP). Cela peut entraîner une sous-activation de procarcinogènes (par exemple, certaines n - nitrosamines) ou une suractivation des dangers non - Exemple: le rat S9 métabolise mal la n - nitrosodiéthylamine (NDEA) par rapport aux enzymes humaines, risquant de faux négatifs.
- Détection limitée du spectre de mutation:
Les souches standard (par exemple, TA98, TA100) ne détectent que des types de mutations spécifiques (cadraves, base - substitutions de paires), des clastogènes manquants ou des cancérogènes épigénétiques.
- Sur - dépendance aux systèmes bactériens:
Étant donné que le test utilise Salmonella typhimurium, il ne tient pas compte des mécanismes de réparation de l'ADN présents dans les cellules de mammifères, ce qui manque potentiellement certains effets mutagènes.
- Faux positifs et négatifs:
Certains composés non - mutagènes peuvent donner des résultats positifs en raison des réponses au stress bactérien, tandis que certains mutagènes nécessitant une activation métabolique complexe peuvent être non détectés.
Le test AMES amélioré
Les dernières personnes de questions / réponses à la version de l'EMA indiquent qu'en raison de la faible sensibilité de certaines n - nitrosamines (par exemple, NDMA) dans les conditions du test AMES standard, les conditions du test AMES amélioré fournie par le Centre national de recherche toxicologique de la FDA (NCTR) sont recommandés. La FDA a conclu que les méthodes standard utilisées pour le test Ames peuvent ne pas être suffisantes pour caractériser le potentiel mutagène des n - nitrosamines, et dans certains cas peuvent produire des résultats négatifs pour les nitrosamines mutagènes connues. En réponse, le Centre national de recherche toxicologique de la FDA a testé différentes conditions pour développer le test AMES amélioré, qui est destiné à fournir une évaluation plus fiable du potentiel mutagène des impuretés de N - nitrosamine.
Les conditions de test Ames (EAT) améliorées suivantes sont fournies par la FDA
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Tester les souches |
Comprend Salmonella Typhimurium TA98, TA100. TA1535, TA1537 et Escherichia coli WP2 UVRA (PKM101) Test Dressing |
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Méthode de test et temps d'isolation |
Les méthodes de pré - isolation et non à plat doivent être utilisées, avec un temps d'isolation recommandé de 30 minutes. |
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Type S9 et concentration |
Le test AMES amélioré doit être effectué pour contenir 30% de foie de rat S9 et 30%Hamster Liver S9. Les surnageants desmosomaux de rat et de hamster (S9) doivent être préparés à partir de foies de rongeurs traités avecenzyme du cytochrome P450- induction des substances (par exemple, une combinaison de phénobarbital et β - naphthoflavone). |
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Contrôle négatif (solvant / excipient) |
Les solvants utilisés doivent être compatibles avec le test Ames en fonction deOCDE 471Lignes directrices. Les solvants disponibles comprennent, sans s'y limiter: (1) eau; (2) solvants organiques tels que l'acétonitrile, le méthanol et le diméthyl sulfoxyde (DMSO). Lorsque des solvants organiques sont utilisés, le volume le plus bas possible dans le mélange de maintien de la maintenance doit être utilisé et il convient de démontrer que la quantité de solvant organique utilisé n'interfère pas avec l'activation métabolique de N - nitrosamines. |
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Contrôle positif |
Selon les directives de l'OCDE 471, la souche - Des contrôles positifs spécifiques doivent être effectués en même temps. En présence de S9, les deux n - nitrosamines connues pour être mutagènes devraient également être utilisées comme témoins positifs. Disponible N - Nitrosamine Les contrôles positifs comprennent: NDMA, 1 - Cyclopentyl - 4 - Nitrosopiperazine NddsRI。 |
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Toutes les autres recommandations sur la détermination de l'AMES doivent suivre les directives de l'OCDE 471 |
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Avantage unique de la fraction du foie de hamster S9
La fraction du foie de hamster S9 est particulièrement précieuse dans les tests d'Ames en raison de sa capacité supérieure à activer certaines n - nitrosamines par rapport au foie de rat S9. Il partage un profil métabolique plus proche des enzymes hépatiques humaines, ce qui la rend plus pertinente pour l'évaluation des risques humains. De plus, le foie de hamster S9 contient des niveaux plus élevés d'enzymes spécifiques du cytochrome P450, qui sont cruciales pour la bioactivation des mutagènes. Il en résulte une amélioration de la sensibilité et une réduction des taux de faux - négatifs, permettant une meilleure détection de mutagènes qui, autrement, ne sont pas détectés avec le foie de rat S9 seul.
Conclusion
Bien que le test AMES standard reste un outil fondamental pour évaluer la mutagénicité, ses limites nécessitent des améliorations pour une meilleure précision. Le test AMES amélioré, en particulier avec l'inclusion de la fraction du foie du hamster S9, améliore considérablement la détection de mutagènes complexes comme les nwitrosamines, combler l'écart entre le métabolisme bactérien et mammifère. Cette progression fournit une méthode plus fiable pour évaluer les cancérogènes humains potentiels et soutient une meilleure décision réglementaire -
Mots-clés: N - Nitrosamines, NDSRIS, OCDE 471, Test AMES amélioré, Hamster Liver S9, enzymes Cytochrome P450, test de mutation
Heure du poste: 2025 - 03 - 12 09:22:09