Poboljšani ames test

Standardni ames test

Ames test je široko korišteni test za otkrivanje mutagenog potencijala u kemijskim spojevima, uključujući n - nitrozamine. Unatoč svom značaju u toksikološkom probiru, standardni AMES test ima nekoliko ograničenja, posebno prilikom procjene spojeva koji zahtijevaju složenu metaboličku aktivaciju.

Ograničenja standardnog Ames testa

Iako Ames test ostaje kamen temeljac u ispitivanju mutagenosti, on ima određena ograničenja:

• Ograničena metabolička aktivacija:

Standardni AMES test obično koristi jetru štakora S9, kojem nedostaje određeni enzimi ljudskog - relevantnih citokroma P450 (CYP). To može dovesti do neaktivacije prokarcinogena (npr. Neki n - nitrozamini) ili prekomjerne aktivacije opasnosti od ljudskog. Primjer: štakor S9 slabo metabolizira n - nitrosodietilamin (NDEA) u usporedbi s ljudskim enzimima, riskirajući lažne negativnosti.

• Ograničeno otkrivanje spektra mutacije:

Standardni sojevi (npr. TA98, TA100) otkrivaju samo specifične vrste mutacija (frameshifts, baza - supstitucije parova), nedostajući klastogeni ili epigenetski karcinogeni.

• Preko - Oslanjanje na bakterijske sustave:

Budući da test koristi Salmonella Typhimurium, on ne uzima u obzir mehanizme popravljanja DNK prisutnih u stanicama sisavaca, potencijalno nedostaju neki mutageni učinci.

• Lažni pozitivni i negativi:

Neki ne - mutageni spojevi mogu dati pozitivne rezultate zbog reakcija na bakterijski stres, dok neki mutageni koji zahtijevaju složenu metaboličku aktivaciju mogu biti neotkriveni.

Poboljšani ames test

Posljednje izdanje EMA -e Q & As Smjernice navodi da se zbog niske osjetljivosti nekih n - nitrozamina (npr. NDMA) u uvjetima standardnog testa Ames, preporučuju uvjeti poboljšanog AMES testa koji je osigurao Nacionalni centar FDA -e za toksikološka istraživanja (NCTR). FDA je zaključila da standardne metode korištene za AMES test možda nisu dovoljne za karakterizaciju mutagenog potencijala n - nitrozamina, a u nekim slučajevima mogu dati negativne rezultate za poznate mutagene nitrozamine. Kao odgovor, Nacionalni centar FDA -e za toksikološka istraživanja testirao je različite uvjete kako bi razvili poboljšani AMES test, koji je namijenjen pružanju pouzdanije procjene mutagenog potencijala nečistoća N - nitrozamina.

Sljedeće poboljšane uvjete AMES testa (EAT) osigurava FDA

Jedinstvena prednost frakcije hrčka jetre S9

Frakcija jetre hrčka S9 posebno je vrijedna u Ames testiranju zbog njegove superiorne sposobnosti aktiviranja određenih n - nitrozamina u usporedbi s jetrom štakora S9. Dijeli bliži metabolički profil ljudskim jetrenim enzimima, što ga čini relevantnijim za procjenu ljudskog rizika. Uz to, jetra hrčka S9 sadrži višu razinu specifičnih enzima citokroma P450, koji su ključni za bioaktivaciju mutagena. To rezultira poboljšanom osjetljivošću i smanjenim lažnim - negativnim stopama, omogućujući bolje otkrivanje mutagena koji u protivnom mogu biti neotkriveni sama jetra štakora S9.

Zaključak

Iako standardni AMES test ostaje temeljni alat za procjenu mutagenosti, njegova ograničenja zahtijevaju poboljšanja za bolju točnost. Poboljšani AMES test, posebno uključivanjem frakcije jetre S9 hrčka, značajno pojačava otkrivanje složenih mutagena poput N - nitrozamina, premošćivši jaz između metabolizma bakterija i sisavaca. Ovaj napredak pruža pouzdaniju metodu za procjenu potencijalnih karcinogena ljudi i podržava bolju regulatornu odluku -

Ključne riječi: N - Nitrozamini, NDSRIS, OECD 471, Poboljšani AMES test, hrčka jetre S9, citokrom P450 enzimi, mutacijski test