N-Nitrosamines үчүн Эймс тести: Мутагендикти баалоо

Ames тестине киришүү

Ames тести, ошондой эле Бактериялык тескери мутация тести катары белгилүү, химиялык кошулмалардын, анын ичинде N-Nitrosamines мутагендик потенциалын баалоо үчүн биологиялык анализ үчүн кеңири колдонулат. 1970-жылдары доктор Брюс Эймс тарабынан иштелип чыккан бул тест гистидин синтезине катышкан гендердин мутациясын алып жүрүүчү Salmonella typhimurium бактериясынын спецификалык штаммдарын колдонот. Сыноо заттын бактериялык ДНКда мутацияга алып келиши мүмкүнбү же жокпу, аныктайт, бул адамдарда потенциалдуу канцерогендиктин көрсөткүчү.

N-Nitrosamines үчүн Ames тестинин актуалдуулугу

N-Nitrosamines алардын генотоксик жана канцерогендик касиеттери менен белгилүү, анткени алар алкилдөө жана кычкылдануу стресси аркылуу ДНКнын бузулушуна алып келиши мүмкүн. Эймс тести алардын мутагендик таасирин аныктоодо өзгөчө пайдалуу, анткени көптөгөн N-Nitrosamines ДНК менен өз ара аракеттенүүгө жөндөмдүү жогорку реактивдүү электрофилдик орто заттарды түзүү үчүн ферменттик конверсия аркылуу метаболизмди активдештирүүнү талап кылат. Бул активдештирүү адатта цитохром P450 ферменттери аркылуу боордо пайда болот. Бул метаболикалык конверсияны in vitro репликациялоо үчүн тест көбүнчө сүт эмүүчүлөрдүн метаболизмин туураган жана мутагендик активдүүлүктү аныктоону күчөтүүчү S9 микс, кемирүүчүлөрдөн алынган боор ферментинин препаратын колдонуу менен метаболикалык активдештирүү менен жана ансыз жүргүзүлөт.

Амес тестинин методологиясы

Ames тестинин стандарттык процедурасы төмөнкү кадамдарды камтыйт:

1. 1. Сыноо штаммдарын даярдоо: гистидин синтези гендеринде мурдатан болгон мутациялары бар Salmonella typhimurium штаммдары колдонулат. Бул штаммдар сырткы гистидин булагысыз өсө албайт, эгерде тескери мутация функцияны калыбына келтирбесе.
2. 2. N-Nitrosamines таасири: Бактериялык культура гистидиндин бир аз өлчөмүн камтыган минималдуу агар пластинасында сыналуучу кошулма (N-Nitrosamine) менен аралаштырылат.
3. 3. Метаболикалык активдештирүү (S9 Mix Кошумча): Адам денесиндеги зат алмашууну эсепке алуу үчүн, кээ бир сыноо үлгүлөрү S9 бөлүкчөсүн, келемиш боор микросомаларынан ферменттик экстракты камтыйт.
4. 4. Инкубация жана өсүү: Пластиналар 37°C температурада 48 саат бою инкубацияланат, эгерде гистидин синтезин калыбына келтирүүчү мутациялар пайда болсо, бактериялык колониялардын өсүшүнө мүмкүндүк берет.
5. 5. Колонияларды эсептөө жана талдоо: Реверттелген колониялардын саны (гистидинди өндүрүү жөндөмүнө ээ болгон бактериялар) эсептелинет жана контролдук плиталар менен салыштырылат.
6. Жыйынтыктарды интерпретациялоо

• Позитивдүү Эймс тести: Контролдукка салыштырмалуу ревертивдүү колониялардын олуттуу өсүшү кошулма мутацияларды жаратып, мутагендик жана потенциалдуу канцерогендик касиеттерди билдирет.
• Терс Эймс тести: Эгерде олуттуу өсүш байкалбаса, тест шарттарында кошулма мутагендик эмес.
• Доза-Жооп байланышы: Мутациянын ылдамдыгын жогорулаткан жогорку дозалар мутагендиктин далилин бекемдейт.

Корутунду

Ames тести N-Nitrosamines мутагендигин баалоо үчүн тез жана экономикалык жактан натыйжалуу ыкмасы болуп саналат. Рак менен алардын байланышын эске алуу менен, бул анализ аркылуу алардын мутагендик касиеттерин аныктоо ченемдик контролдоо жана тобокелдиктерди баалоо үчүн өтө маанилүү болуп саналат. Бул сыноо токсикологиялык текшерүүдө жана химиялык коопсуздукту баалоодо негиз болуп кала берет.

Ачкыч сөздөр: N-Nitrosamines, NDSRIs, OECD 471, Өркүндөтүлгөн Амес тести, Hamster боор S9, Cytochrome P450 ферменттери, Мутация тести