ການທົດສອບ Ames ສໍາລັບ N-Nitrosamines: ການປະເມີນການ mutagenicity

ແນະນໍາການສອບເສັງ Ames

ການທົດສອບ Ames, ເຊິ່ງເອີ້ນກັນວ່າ Bacterial Reverse Mutation Test ແມ່ນໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງສໍາລັບການວິເຄາະທາງຊີວະວິທະຍາທີ່ປະເມີນທ່າແຮງການ mutagenic ຂອງທາດປະສົມເຄມີ, ລວມທັງ N-Nitrosamines. ພັດທະນາໂດຍດຣ Bruce Ames ໃນຊຸມປີ 1970, ການທົດສອບນີ້ໃຊ້ສາຍພັນສະເພາະຂອງເຊື້ອແບັກທີເຣັຍ Salmonella typhimurium ທີ່ເຮັດໃຫ້ເກີດການກາຍພັນໃນພັນທຸກໍາທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການສັງເຄາະ histidine. ການທົດສອບກໍານົດວ່າສານສາມາດເຮັດໃຫ້ເກີດການກາຍພັນໃນ DNA ຂອງເຊື້ອແບັກທີເຣັຍ, ສະຫນອງຕົວຊີ້ບອກເຖິງການເປັນມະເຮັງທີ່ເປັນໄປໄດ້ໃນມະນຸດ.

ຄວາມກ່ຽວຂ້ອງຂອງການທົດສອບ Ames ສໍາລັບ N-Nitrosamines

N-Nitrosamines ແມ່ນເປັນທີ່ຮູ້ຈັກສໍາລັບຄຸນສົມບັດ genotoxic ແລະ carcinogenic ຂອງພວກມັນ, ຍ້ອນວ່າພວກມັນສາມາດເຮັດໃຫ້ເກີດຄວາມເສຍຫາຍຂອງ DNA ຜ່ານ alkylation ແລະຄວາມກົດດັນ oxidative. ການທົດສອບ Ames ແມ່ນເປັນປະໂຫຍດໂດຍສະເພາະໃນການກວດສອບຜົນກະທົບ mutagenic ຂອງເຂົາເຈົ້າ, ເນື່ອງຈາກວ່າ N-Nitrosamines ຈໍານວນຫຼາຍຕ້ອງການການກະຕຸ້ນການເຜົາຜະຫລານອາຫານໂດຍຜ່ານການປ່ຽນ enzymatic ເພື່ອສ້າງເປັນຕົວກາງ electrophilic reactive ສູງທີ່ສາມາດພົວພັນກັບ DNA. ການກະຕຸ້ນນີ້ປົກກະຕິແລ້ວເກີດຂື້ນໃນຕັບໂດຍຜ່ານ enzymes cytochrome P450. ເພື່ອເຮັດເລື້ມຄືນການປ່ຽນເມຕາໂບລິກນີ້ໃນ vitro, ການທົດສອບມັກຈະດໍາເນີນໂດຍແລະບໍ່ມີການກະຕຸ້ນການເຜົາຜະຫລານການເຜົາຜະຫລານໂດຍໃຊ້ S9 ປະສົມ, ການກະກຽມ enzyme ຕັບທີ່ມາຈາກຈໍາພວກຫນູ, ເຊິ່ງ mimics ການເຜົາຜະຫລານຂອງສັດລ້ຽງລູກດ້ວຍນົມແລະເສີມຂະຫຍາຍການກວດພົບກິດຈະກໍາ mutagenic.

ວິທີການຂອງການທົດສອບ Ames

ຂັ້ນຕອນມາດຕະຖານຂອງການທົດສອບ Ames ປະກອບມີຂັ້ນຕອນຕໍ່ໄປນີ້:

1. 1. ການກະກຽມສາຍພັນການທົດສອບ: ເຊື້ອສາຍພັນ Salmonella typhimurium ທີ່ມີການກາຍພັນທີ່ມີຢູ່ແລ້ວໃນພັນທຸກໍາການສັງເຄາະ histidine. ສາຍພັນເຫຼົ່ານີ້ບໍ່ສາມາດເຕີບໂຕໄດ້ໂດຍບໍ່ມີແຫຼ່ງ histidine ພາຍນອກເວັ້ນເສຍແຕ່ວ່າການກາຍພັນແບບກົງກັນຂ້າມຈະຟື້ນຟູຫນ້າທີ່.
2. 2. ການສໍາຜັດກັບ N-Nitrosamines: ເຊື້ອແບັກທີເຣັຍໄດ້ຖືກປະສົມກັບສານປະສົມທົດສອບ (N-Nitrosamine) ຢູ່ໃນແຜ່ນ agar ທີ່ມີຈໍານວນ histidine ເລັກນ້ອຍ.
3. 3. ການກະຕຸ້ນການເຜົາຜະຫລານ (ການເພີ່ມ S9 ປະສົມ): ເພື່ອບັນຊີສໍາລັບການປ່ຽນແປງ metabolic ໃນຮ່າງກາຍຂອງມະນຸດ, ບາງຕົວຢ່າງການທົດສອບປະກອບມີ S9 fraction, ສານສະກັດຈາກ enzymatic ຈາກ microsomes ຕັບຫນູ.
4. 4. ການບວມ ແລະ ການຈະເລີນເຕີບໂຕ: ແຜ່ນໃບຖືກອົບຢູ່ທີ່ 37 ອົງສາເຊ ເປັນເວລາ 48 ຊົ່ວໂມງ, ອະນຸຍາດໃຫ້ອານານິຄົມຂອງແບັກທີເລຍຂະຫຍາຍຕົວ ຖ້າມີການກາຍພັນທີ່ຟື້ນຟູການສັງເຄາະ histidine.
5. 5. ການນັບອານານິຄົມ ແລະ ການວິເຄາະ: ຈໍານວນຂອງອານານິຄົມ revertant (ເຊື້ອແບັກທີເຣັຍທີ່ regained ຄວາມສາມາດໃນການຜະລິດ histidine) ແມ່ນນັບແລະປຽບທຽບກັບແຜ່ນຄວບຄຸມ.
6. ການຕີຄວາມໝາຍຂອງຜົນໄດ້ຮັບ

• ການທົດສອບ Ames ໃນທາງບວກ: ການເພີ່ມຂຶ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນອານານິຄົມ revertant ເມື່ອປຽບທຽບກັບການຄວບຄຸມຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າສານປະສົມເຮັດໃຫ້ເກີດການກາຍພັນ, ຫມາຍເຖິງການ mutagenic ແລະອາດມີສານກໍ່ມະເຮັງ.
• ການທົດສອບ Ames ໃນທາງລົບ: ຖ້າບໍ່ມີການສັງເກດເຫັນການເພີ່ມຂື້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ, ທາດປະສົມດັ່ງກ່າວມີແນວໂນ້ມທີ່ຈະບໍ່ກາຍພັນພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂການທົດສອບ.
• Dose-Response Relationship: ປະລິມານທີ່ສູງຂຶ້ນເຮັດໃຫ້ອັດຕາການກາຍພັນເພີ່ມຂຶ້ນເຮັດໃຫ້ຫຼັກຖານຂອງ mutagenicity ເພີ່ມຂຶ້ນ.

ສະຫຼຸບ

ການ​ທົດ​ສອບ Ames ເປັນ​ວິ​ທີ​ການ​ໄວ​ແລະ​ຄ່າ​ໃຊ້​ຈ່າຍ-ປະ​ສິດ​ທິ​ຜົນ​ສໍາ​ລັບ​ການ​ປະ​ເມີນ​ການ mutagenicity ຂອງ N-Nitrosamines​. ເນື່ອງຈາກການພົວພັນກັບມະເຮັງ, ການກໍານົດຄຸນສົມບັດ mutagenic ຂອງເຂົາເຈົ້າໂດຍຜ່ານການວິເຄາະນີ້ແມ່ນສໍາຄັນສໍາລັບການຄວບຄຸມລະບຽບການແລະການປະເມີນຄວາມສ່ຽງ. ການທົດສອບນີ້ຍັງຄົງເປັນພື້ນຖານໃນການກວດສອບສານພິດແລະການປະເມີນຄວາມປອດໄພຂອງສານເຄມີ.

ຄໍາສໍາຄັນ: N-Nitrosamines, NDSRIs, OECD 471, Enhanced Ames test, Hamster liver S9, Cytochrome P450 enzymes, ການທົດສອບການກາຍພັນ