Стандарден тест АМЕС
Тестот АМЕС е широко користена анализа за откривање на мутагениот потенцијал во хемиските соединенија, вклучително и n - нитрозамини. И покрај неговото значење во токсиколошкото скрининг, стандардниот тест АМЕС има неколку ограничувања, особено при проценка на соединенија кои бараат комплексно метаболичко активирање.
Ограничувања на стандардниот тест АМЕС
Додека тестот Амес останува камен -темелник во тестирањето на мутагеност, тој има одредени ограничувања:
- Ограничено метаболичко активирање:
Стандардниот тест АМЕС обично користи црниот дроб на стаорци S9, на кој му недостасуваат одредени човечки - релевантни ензими на цитохром P450 (CYP). Ова може да доведе до недоволно активирање на прокарциногени (на пр., Некои N - нитрозамини) или прекумерно активирање на не - човечки опасности. Пример: Стаорец S9 слабо го метаболизира N - нитрозодиетиламин (NDEA) во споредба со човечките ензими, ризикувајќи лажни негативи.
- Ограничено откривање на спектарот на мутација:
Стандардните соеви (на пр., TA98, TA100) откриваат само специфични типови на мутација (рамки, бази - замени на пар), исчезнати клистогени или епигенетски канцерогени.
- Преку - потпирање на бактериски системи:
Бидејќи тестот користи Salmonella typhimurium, тој не претставува механизми за поправка на ДНК присутни во клетките на цицачи, потенцијално недостасува некои мутагени ефекти.
- Лажни позитиви и негативи:
Некои не - мутагени соединенија може да дадат позитивни резултати како резултат на реакциите на бактериски стрес, додека некои мутагени за кои е потребно комплексно метаболичко активирање може да бидат неоткриени.
Подобрениот тест Амес
Најновото издание на ЕМА Q & AS како насоки наведува дека заради ниската чувствителност на некои N - нитрозамини (на пр., NDMA) под услови на стандарден тест АМЕС, услови на засилен тест АМЕС обезбеден од Националниот центар на ФДА за токсиколошко истражување (NCTR). ФДА заклучи дека стандардните методи што се користат за тестот АМЕС може да не бидат доволни за да се карактеризираат мутагениот потенцијал на n - нитрозамини, а во некои случаи може да дадат негативни резултати за познати мутагени нитрозамини. Како одговор, Националниот центар за токсиколошко истражување на ФДА тестира различни услови за развој на засилен тест АМЕС, кој има за цел да обезбеди посигурна проценка на мутагениот потенцијал на N - нитрозамин нечистотии.
Следниве подобрени услови за тестирање на Амес (EAT) се обезбедени од ФДА
|
Тест видови |
Вклучува Salmonella Typhimurium TA98, TA100. TA1535, TA1537 и Escherichia coli WP2 UVRA (PKM101) Тест вирус |
|
Метод на тестирање и време пред - изолација |
Треба да се користат пред - изолација и не - методи на рамни плочки, со препорачано време пред - изолација од 30 минути. |
|
S9 тип и концентрација |
Подобрениот тест АМЕС треба да се изврши во содржина на 30% црниот дроб на стаорци S9 и 30%Хрчак црн дроб S9. Десмозомските супернатанти на стаорец и хрчак (S9) треба да бидат подготвени од црниот дроб на глодари третирани соЦитохром P450 ензим- поттикнување на супстанции (на пр., Комбинација на фенобарбитал и β - нафтофлавон). |
|
Негативна (растворувачка/ексципиентна) контрола |
Користените растворувачи треба да бидат компатибилни со тестот Амес споредОЕЦД 471упатства. Достапните растворувачи вклучуваат, но не се ограничени на: (1) вода; (2) органски растворувачи како што се ацетонитрил, метанол и диметил сулфоксид (ДМСО). Кога се користат органски растворувачи, треба да се користи најнизок можен волумен во мешавината пред - држење и треба да се докаже дека количината на користен органски растворувач не се меша во метаболичкото активирање на N - нитрозамини. |
|
Позитивна контрола |
Според упатствата на OECD 471, истовремено треба да се извршат вирус - специфични позитивни контроли. Во присуство на S9, двата n - нитрозамини за кои се знае дека се мутагени, исто така, треба да се користат како позитивни контроли. Достапни N - нитрозамин Позитивни контроли вклучуваат: NDMA, 1 - Циклопентил - 4 - нитросопипаразин ndsris。 |
|
Сите други препораки за определување на АМЕС треба да следат упатства за ОЕЦД 471 |
|
Уникатна предност на фракцијата на црниот дроб на хрчак S9
Фракцијата на црниот дроб на хрчак S9 е особено важен во тестирањето на АМЕС заради неговата супериорна способност да активира одредени n - нитрозамини во споредба со црниот дроб на стаорци S9. Тој споделува поблизок метаболички профил на човечки ензими на црниот дроб, што го прави порелевантен за проценка на ризикот од човекот. Покрај тоа, хрчак црниот дроб S9 содржи повисоки нивоа на специфични ензими на цитохром P450, кои се клучни за биоактивирање на мутагени. Ова резултира во подобрена чувствителност и намалени лажни - негативни стапки, овозможувајќи подобро откривање на мутагени кои инаку може да одат неоткриени само со црниот дроб на стаорци S9.
Заклучок
Додека стандардниот тест АМЕС останува фундаментална алатка за проценка на мутагеноста, неговите ограничувања бараат подобрувања за подобра точност. Подобрениот тест АМЕС, особено со вклучување на фракцијата на црниот дроб на хрчак S9, значително го подобрува откривањето на сложени мутагени како N - нитрозамини, премостувајќи го јазот помеѓу метаболизмот на бактерии и цицачи. Овој напредок обезбедува посигурен метод за проценка на потенцијалните човечки карциногени и поддржува подобра регулаторна одлука - Донесување.
Клучни зборови: N - нитрозамини, NDSRIS, OECD 471, Засилен тест АМЕС, хрчак црн дроб S9, цитохром P450 ензими, тест за мутација
Време на објавување: 2025 - 03 - 12 09:22:09