Тест на Ејмс за N - Нитрозамини: Проценка на мутагеност

Вовед во тестот Ејмс

Тестот Ејмс, исто така познат како Тест за бактериска обратна мутација е широко користен за биолошки тест кој го проценува мутагениот потенцијал на хемиските соединенија, вклучително и N-Nitrosamine. Развиен од д-р Брус Ејмс во 1970-тите, овој тест користи специфични соеви на бактеријата Salmonella typhimurium кои носат мутации во гените вклучени во синтезата на хистидин. Тестот одредува дали некоја супстанција може да предизвика мутации во бактериската ДНК, што дава индикација за потенцијална канцерогеност кај луѓето.

Релевантност на Ејмс тестот за N-Nitrosamine

N-Нитрозамините се познати по нивните генотоксични и канцерогени својства, бидејќи можат да предизвикаат оштетување на ДНК преку алкилација и оксидативен стрес. Тестот Ејмс е особено корисен за откривање на нивните мутагени ефекти, бидејќи многу N-Нитрозамини бараат метаболичко активирање преку ензимска конверзија за да формираат високо реактивни електрофилни посредници способни за интеракција со ДНК. Ова активирање обично се случува во црниот дроб преку ензимите на цитохром P450. За да се реплицира оваа метаболичка конверзија ин витро, тестот често се спроведува со и без метаболичко активирање со користење на S9 микс, хепатален ензимски препарат добиен од глодари, кој го имитира метаболизмот кај цицачите и го подобрува откривањето на мутагената активност.

Методологија на тестот Ејмс

Стандардната процедура на тестот Ејмс ги вклучува следните чекори:

1. 1. Подготовка на тест соеви: Се користат соеви Salmonella typhimurium со претходно постоечки мутации во гените за синтеза на хистидин. Овие соеви не можат да растат без надворешен извор на хистидин, освен ако обратна мутација не ја врати функцијата.
2. 2. Изложеност на N-Нитрозамини: бактериската култура се меша со тест соединението (N-Nitrosamine) на минимална плоча со агар која содржи мала количина на хистидин.
3. 3. Метаболичко активирање (додавање микс S9): За да се земе предвид метаболичката конверзија во човечкото тело, некои примероци за тестирање вклучуваат фракција S9, ензимски екстракт од микрозоми на црниот дроб на стаорци.
4. 4. Инкубација и раст: Плочите се инкубираат на 37°C за 48 часа, дозволувајќи им на бактериските колонии да растат доколку се појават мутации кои ја обновуваат синтезата на хистидин.
5. 5. Броење и анализа на колониите: Се брои бројот на ревертантни колонии (бактерии кои ја вратиле способноста да произведуваат хистидин) и се споредуваат со контролните плочи.
6. Толкување на резултатите

• Позитивен Ејмс тест: Значително зголемување на ревертантните колонии во споредба со контролната сугерира дека соединението индуцира мутации, што имплицира мутагени и потенцијално канцерогени својства.
• Негативен тест на Ејмс: Ако не се забележи значајно зголемување, соединението најверојатно не е мутагено во услови на испитување.
• Врска со доза-одговор: повисоките дози што доведуваат до зголемени стапки на мутации ги зајакнуваат доказите за мутагеност.

Заклучок

Тестот Ејмс е брз и економичен метод за проценка на мутагеноста на N-Nitrosamine. Со оглед на нивната поврзаност со ракот, идентификувањето на нивните мутагени својства преку оваа анализа е од клучно значење за регулаторната контрола и проценката на ризикот. Овој тест останува камен-темелник во токсиколошкиот скрининг и евалуацијата на хемиската безбедност.

Клучни зборови: N-Nitrosamine, NDSRIs, OECD 471, Enhanced Ames тест, црн дроб на хрчак S9, ензими на цитохром P450, тест за мутација