Standaard AMES -test
De AMES -test is een veelgebruikte test voor het detecteren van mutagene potentieel in chemische verbindingen, waaronder n - nitrosamines. Ondanks de betekenis ervan bij toxicologische screening, heeft de standaard AMES -test verschillende beperkingen, met name bij het evalueren van verbindingen die complexe metabole activering vereisen.
Beperkingen van de standaard AMES -test
Hoewel de AMES -test een hoeksteen blijft bij het testen van mutageniteit, heeft het bepaalde beperkingen:
- Beperkte metabole activering:
De standaard AMES -test gebruikt typisch rattenlever S9, die bepaalde menselijke - relevante cytochroom P450 (CYP) enzymen mist. Dit kan leiden tot een underactivering van procarcinogenen (bijvoorbeeld sommige N - nitrosamines) of overactivering van niet -- menselijke gevaren. Voorbeeld: rat S9 metaboliseert N - nitrosodiethylamine (NDEA) slecht in vergelijking met menselijke enzymen, waardoor valse negatieven riskeren.
- Beperkte mutatiespectrumdetectie:
Standaardstammen (bijv. TA98, TA100) detecteren alleen specifieke mutatietypen (frameshifts, base - paarsubstituties), ontbrekende clastogenen of epigenetische carcinogenen.
- Over - afhankelijkheid van bacteriesystemen:
Aangezien de test salmonella typhimurium gebruikt, houdt deze geen rekening met DNA -reparatiemechanismen die aanwezig zijn in zoogdiercellen, wat mogelijk sommige mutagene effecten mist.
- Valse positieven en negatieven:
Sommige niet -- mutagene verbindingen kunnen positieve resultaten opleveren als gevolg van bacteriële stressreacties, terwijl sommige mutagenen die complexe metabole activering vereisen onopgemerkt kunnen blijven.
De verbeterde AMES -test
EMA's nieuwste release Q & As richtlijnen stelt dat vanwege de lage gevoeligheid van sommige N - nitrosamines (bijv. NDMA) onder de voorwaarden van de standaard AMES -test, de voorwaarden van de verbeterde AMES -test verstrekt door FDA's National Center for Toxicological Research (NCTR). De FDA heeft geconcludeerd dat de standaardmethoden die worden gebruikt voor de AMES -test mogelijk niet voldoende zijn om het mutagene potentieel van n - nitrosamines te karakteriseren en in sommige gevallen negatieve resultaten kan opleveren voor bekende mutagene nitrosaminen. In reactie hierop heeft het National Center for Toxicological Research van de FDA verschillende omstandigheden getest om de verbeterde AMES -test te ontwikkelen, die bedoeld is om een betrouwbaardere beoordeling te bieden van het mutagene potentieel van n - nitrosamine -onzuiverheden.
De volgende verbeterde AMES -test (EET) -omstandigheden worden geleverd door de FDA
|
Teststammen |
Inclusief Salmonella Typhimurium TA98, TA100. TA1535, TA1537 en Escherichia coli WP2 UVRA (PKM101) Teststam |
|
Testmethode en pre - isolatietijd |
Pre - isolatie en niet -- flatbeddding -methoden moeten worden gebruikt, met een aanbevolen pre - isolatietijd van 30 minuten. |
|
S9 -type en concentratie |
De verbeterde AMES -test moet worden uitgevoerd bij het bevatten van 30% rattenlever S9 en 30%Hamster lever S9. Ratten en hamster desmosomale supernatanten (S9's) moeten worden bereid uit knaagdierlevers die zijn behandeld metCytochrome P450 -enzym- inducerende stoffen (bijv. Een combinatie van fenobarbital en β - naftoflavone). |
|
Negatieve (oplosmiddel/excipient) controle |
De gebruikte oplosmiddelen moeten volgens de AMES -test volgens de AMES -test zijnOESO 471richtlijnen. Beschikbare oplosmiddelen omvatten, maar zijn niet beperkt tot: (1) water; (2) Organische oplosmiddelen zoals acetonitril, methanol en dimethylsulfoxide (DMSO). Wanneer organische oplosmiddelen worden gebruikt, moet het laagst mogelijke volume in het pre - houdmengsel worden gebruikt en moet worden aangetoond dat de hoeveelheid gebruikte organische oplosmiddelen niet interfereert met de metabole activering van n - nitrosamines. |
|
Positieve controle |
Volgens de OESO 471 -richtlijnen moeten stam - specifieke positieve controles tegelijkertijd worden uitgevoerd. In aanwezigheid van S9 moeten de twee n - nitrosaminen waarvan bekend is dat ze mutageen zijn, ook als positieve controles worden gebruikt. Beschikbaar N - Nitrosamine Positieve controles zijn onder meer: NDMA, 1 - Cyclopentyl - 4 - Nitrosopiperazine ndsris。 |
|
Alle andere aanbevelingen voor AMES -bepaling moeten de OESO 471 -richtlijnen volgen |
|
Uniek voordeel van hamster lever S9 fractie
Hamster -lever S9 -fractie is bijzonder waardevol bij het testen van AME's vanwege het superieure vermogen om bepaalde N - nitrosamines te activeren in vergelijking met rattenlever S9. Het deelt een nauwer metabolisch profiel aan menselijke leverenzymen, waardoor het relevanter wordt voor menselijke risicobeoordeling. Bovendien bevat hamster -lever S9 hogere niveaus van specifieke cytochroom P450 -enzymen, die cruciaal zijn voor de bioactivatie van mutagenen. Dit resulteert in verbeterde gevoeligheid en verminderde valse - negatieve snelheden, waardoor een betere detectie van mutagenen mogelijk is die anders niet kunnen worden gedetecteerd met alleen S9 van rattenlever.
Conclusie
Hoewel de standaard AMES -test een fundamenteel hulpmiddel blijft voor het beoordelen van mutageniteit, vereisen de beperkingen ervan verbeteringen voor een betere nauwkeurigheid. De verbeterde AMES -test, met name met de opname van Hamster Lever S9 -fractie, verbetert de detectie van complexe mutagenen zoals N - nitrosamines aanzienlijk, waarbij de kloof tussen bacteriële en zoogdiermetabolisme overbrugt. Deze vooruitgang biedt een betrouwbaardere methode voor het evalueren van potentiële menselijke carcinogenen en ondersteunt een betere regulerende beslissing -
Sleutelwoorden: N - Nitrosamines, NDSRIS, OESO 471, verbeterde AMES -test, Hamster Liver S9, Cytochrome P450 Enzymen, Mutation Test
Posttijd: 2025 - 03 - 12 09:22:09