การทดสอบมาตรฐาน Ames
การทดสอบ AMES เป็นการทดสอบที่ใช้กันอย่างแพร่หลายสำหรับการตรวจจับศักยภาพการกลายพันธุ์ในสารเคมีรวมถึง N - nitrosamines แม้จะมีความสำคัญในการตรวจคัดกรองทางพิษวิทยา แต่การทดสอบ AMES มาตรฐานมีข้อ จำกัด หลายประการโดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อประเมินสารประกอบที่ต้องการการกระตุ้นการเผาผลาญที่ซับซ้อน
ข้อ จำกัด ของการทดสอบ Ames มาตรฐาน
ในขณะที่การทดสอบ AMES ยังคงเป็นรากฐานที่สำคัญในการทดสอบการกลายพันธุ์ แต่ก็มีข้อ จำกัด บางประการ:
- การเปิดใช้งานการเผาผลาญที่ จำกัด :
การทดสอบ AMES มาตรฐานมักจะใช้ตับหนู S9 ซึ่งขาดเอนไซม์มนุษย์ที่เกี่ยวข้องกับเอนไซม์ Cytochrome P450 (CYP) สิ่งนี้สามารถนำไปสู่การใช้งานของ procarcinogens underactivative (เช่น N - nitrosamines) หรือการใช้งานมากเกินไปของอันตรายที่ไม่ใช่ของมนุษย์ ตัวอย่าง: หนู S9 เมตาบอลิซึมไม่ดี n - nitrosodiethylamine (NDEA) เมื่อเทียบกับเอนไซม์ของมนุษย์
- การตรวจจับสเปกตรัมการกลายพันธุ์ที่ จำกัด :
สายพันธุ์มาตรฐาน (เช่น TA98, TA100) ตรวจจับเฉพาะประเภทการกลายพันธุ์เฉพาะ (frameshifts, ฐาน - การทดแทนคู่), clastogens ที่หายไปหรือสารก่อมะเร็ง epigenetic
- มากกว่า - พึ่งพาระบบแบคทีเรีย:
เนื่องจากการทดสอบใช้ Salmonella typhimurium จึงไม่ได้อธิบายถึงกลไกการซ่อมแซม DNA ที่มีอยู่ในเซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมอาจขาดผลกระทบบางอย่างของการกลายพันธุ์
- ข้อดีและเชิงลบที่ผิดพลาด:
สารประกอบที่ไม่ใช่การกลายพันธุ์บางอย่างอาจให้ผลลัพธ์ในเชิงบวกเนื่องจากการตอบสนองต่อความเครียดของแบคทีเรียในขณะที่บาง mutagens ที่ต้องการการกระตุ้นเมตาบอลิซึมที่ซับซ้อนอาจไม่ถูกตรวจพบ
การทดสอบ AMES ที่ได้รับการปรับปรุง
Q & As คำแนะนำล่าสุดของ EMA ระบุว่าเนื่องจากความไวต่ำของ N - nitrosamines (เช่น NDMA) ภายใต้เงื่อนไขของการทดสอบมาตรฐาน AMES ของ AMES การทดสอบ AMES ที่ได้รับการปรับปรุงโดยศูนย์การวิจัยทางพิษวิทยาแห่งชาติของ FDA (NCTR) องค์การอาหารและยาได้ข้อสรุปว่าวิธีการมาตรฐานที่ใช้สำหรับการทดสอบ AMES อาจไม่เพียงพอที่จะจำแนกลักษณะศักยภาพการกลายพันธุ์ของ N - nitrosamines และในบางกรณีอาจให้ผลลัพธ์เชิงลบสำหรับ nitrosamines กลายพันธุ์ที่รู้จักกัน ในการตอบสนองศูนย์การวิจัยทางพิษวิทยาแห่งชาติของ FDA ได้ทำการทดสอบเงื่อนไขที่แตกต่างกันเพื่อพัฒนาการทดสอบ AMES ที่ได้รับการปรับปรุงซึ่งมีวัตถุประสงค์เพื่อให้การประเมินที่เชื่อถือได้มากขึ้นเกี่ยวกับศักยภาพการกลายพันธุ์ของสิ่งสกปรก N - nitrosamine
เงื่อนไขการทดสอบ AMES ที่ได้รับการปรับปรุง (EAT) ต่อไปนี้จัดทำโดย FDA
|
ทดสอบสายพันธุ์ |
รวมถึง Salmonella Typhimurium Ta98, TA100 TA1535, TA1537 และ Escherichia coli WP2 UVRA (PKM101) การทดสอบสายพันธุ์ |
|
วิธีทดสอบและเวลาก่อน - |
ควรใช้ก่อน - ฉนวนกันความร้อนและวิธีการแบน - |
|
ประเภทและความเข้มข้นของ S9 |
การทดสอบ AMES ที่ได้รับการปรับปรุงควรดำเนินการในตับหนู 30% และ 30%ตับแฮมสเตอร์ S9- หนูและหนูแฮมสเตอร์ desmosomal supernatants (S9s) ควรเตรียมจากตับหนูที่ได้รับการรักษาด้วยCytochrome P450 เอนไซม์- สารกระตุ้น (เช่นการรวมกันของ phenobarbital และβ - naphthoflavone) |
|
การควบคุมเชิงลบ (ตัวทำละลาย/excipient) |
ตัวทำละลายที่ใช้ควรเข้ากันได้กับการทดสอบ AMES ตามOECD 471แนวทาง ตัวทำละลายที่มีอยู่รวมถึง แต่ไม่ จำกัด เพียง: (1) น้ำ (2) ตัวทำละลายอินทรีย์เช่น acetonitrile, methanol และ dimethyl sulfoxide (DMSO) เมื่อใช้ตัวทำละลายอินทรีย์ปริมาณที่ต่ำที่สุดเท่าที่จะเป็นไปได้ในส่วนผสมก่อน - การถือครองควรจะใช้และควรแสดงให้เห็นว่าปริมาณของตัวทำละลายอินทรีย์ที่ใช้ไม่ได้รบกวนการกระตุ้นการเผาผลาญของ N - nitrosamines |
|
การควบคุมเชิงบวก |
ตามแนวทางของ OECD 471 ความเครียด - การควบคุมเชิงบวกเฉพาะควรดำเนินการในเวลาเดียวกัน ในการปรากฏตัวของ S9 สอง n - nitrosamines ที่รู้จักกันว่าเป็นกลายพันธุ์ควรใช้เป็นตัวควบคุมเชิงบวก มี n - nitrosamine positive controls รวมถึง: NDMA, 1 - cyclopentyl - 4 - nitrosopiperazine ndsris 。 |
|
คำแนะนำอื่น ๆ ทั้งหมดเกี่ยวกับการตัดสินใจของ AMES ควรปฏิบัติตามแนวทาง OECD 471 |
|
ข้อได้เปรียบที่เป็นเอกลักษณ์ของแฮมสเตอร์ตับ S9
Hamster Liver Fraction S9 นั้นมีค่าอย่างยิ่งในการทดสอบ AMES เนื่องจากความสามารถที่เหนือกว่าในการเปิดใช้งาน N - nitrosamines บางอย่างเมื่อเทียบกับหนูตับ S9 มันแบ่งปันโปรไฟล์การเผาผลาญอย่างใกล้ชิดกับเอนไซม์ตับของมนุษย์ทำให้มีความเกี่ยวข้องมากขึ้นสำหรับการประเมินความเสี่ยงของมนุษย์ นอกจากนี้ Hamster Liver S9 ยังมีเอนไซม์ cytochrome P450 ที่เฉพาะเจาะจงที่สูงขึ้นซึ่งมีความสำคัญต่อการออกฤทธิ์ทางชีวภาพของ mutagens สิ่งนี้ส่งผลให้ความไวที่ดีขึ้นและลดอัตราเท็จ - ลบทำให้การตรวจจับ mutagens ที่ดีขึ้นซึ่งอาจตรวจไม่พบกับตับหนู S9 เพียงอย่างเดียว
บทสรุป
ในขณะที่การทดสอบมาตรฐาน AMES ยังคงเป็นเครื่องมือพื้นฐานสำหรับการประเมินการกลายพันธุ์ข้อ จำกัด ของมันจำเป็นต้องมีการปรับปรุงเพื่อความแม่นยำที่ดีขึ้น การทดสอบ AMES ที่ได้รับการปรับปรุงโดยเฉพาะอย่างยิ่งกับการรวมส่วนของตับแฮมสเตอร์ S9 ช่วยเพิ่มการตรวจจับการกลายพันธุ์ที่ซับซ้อนเช่น n - nitrosamines, เชื่อมช่องว่างระหว่างการเผาผลาญของแบคทีเรียและสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม ความก้าวหน้านี้ให้วิธีการที่เชื่อถือได้มากขึ้นสำหรับการประเมินสารก่อมะเร็งมนุษย์ที่มีศักยภาพและสนับสนุนการตัดสินใจด้านกฎระเบียบที่ดีขึ้น - การทำ
คำสำคัญ: N - nitrosamines, NDSRIS, OECD 471, การทดสอบ AMES ที่ปรับปรุงแล้ว, Hamster Liver S9, Cytochrome P450 เอนไซม์, การทดสอบการกลายพันธุ์
เวลาโพสต์: 2025 - 03 - 12 09:22:09