Standardni AMES test
Amesov test je široko uporabljen test za odkrivanje mutagenega potenciala v kemičnih spojinah, vključno z n - nitrozamini. Kljub pomembnosti toksikološkega presejanja ima standardni AMES test več omejitev, zlasti pri ocenjevanju spojin, ki zahtevajo zapleteno presnovno aktivacijo.
Omejitve standardnega testa AMES
Medtem ko test Ames ostaja temelj pri testiranju mutagenosti, ima določene omejitve:
- Omejena presnovna aktivacija:
Standardni AMES test običajno uporablja podgane jetra S9, ki nimajo določenih človeških - ustreznih encimov citokroma P450 (CYP). To lahko privede do premajhne aktivacije prokarcinogenov (npr. Nekateri n - nitrozamini) ali prekomerno aktivacijo ne - človeških nevarnosti. Primer: Rat S9 slabo presnavlja n - nitrosodietilamin (NDEA) v primerjavi s človeškimi encimi, kar tvega lažne negativnosti.
- Omejeno odkrivanje mutacijskega spektra:
Standardni sevi (npr. TA98, TA100) zaznajo samo specifične vrste mutacij (premiki okvirjev, baze - substitucije parov), manjkajoči klastogeni ali epigenetski rakotvorni karcinogeni.
- Preko - zanašanje na bakterijske sisteme:
Ker test uporablja salmonello tifimurium, ne upošteva mehanizmov za popravilo DNK, ki so prisotni v celicah sesalcev, kar lahko manjka nekatere mutagene učinke.
- Lažni pozitivni in negativi:
Nekatere ne - mutagene spojine lahko dajo pozitivne rezultate zaradi bakterijskih stresnih odzivov, medtem ko nekateri mutageni, ki zahtevajo kompleksno presnovno aktivacijo, lahko ostanejo neopaženi.
Izboljšan test AMES
EMA -jeva zadnja izdaja Q & AS As As pravi, da so zaradi nizke občutljivosti nekaterih n - nitrozaminov (npr. NDMA) pod pogoji standardnega Ames testa, pogoji izboljšanega Ames testa, ki ga je zagotovil FDA Nacionalni center za toksikološke raziskave (NCTR). FDA je ugotovila, da standardne metode, ki se uporabljajo za test AMES, morda ne zadostujejo za karakterizacijo mutagenega potenciala N - nitrozaminov, v nekaterih primerih pa lahko daje negativne rezultate za znane mutagene nitrozamine. Kot odgovor na toksikološke raziskave FDA je preizkušal različne pogoje za razvoj izboljšanega testa AMES, ki naj bi zagotovil zanesljivejšo oceno mutagenega potenciala n - nitrozaminskih nečistoč.
Naslednje izboljšane pogoje AMES (EAT) zagotavlja FDA
|
Testni sevi |
Vključuje Salmonella Typhimurium TA98, TA100. TA1535, TA1537 in Escherichia coli WP2 UVRA (PKM101) testni sev |
|
Metoda testa in čas izolacije |
Uporabiti je treba pred - izolacijo in ne - ravne metode, s priporočenim pred - izolacijskim časom 30 minut. |
|
S9 tip in koncentracija |
Izboljšani AMES test je treba izvesti v 30% podganah jeter S9 in 30%Hrška jetra S9. Desmosomske supernatante podgane in hrčka (S9) je treba pripraviti iz jeter glodalcev, zdravljenih zCitokrom encim P450- induciranje snovi (npr. Kombinacija fenobarbitala in β - naftoflavona). |
|
Negativni (topilni/pomožni) nadzor |
Uporabljena topila bi morala biti združljiva s testom AMES v skladu zOECD 471smernice. Na voljo topila vključujejo, vendar niso omejena na: (1) voda; (2) Organska topila, kot so acetonitril, metanol in dimetil sulfoksid (DMSO). Kadar se uporabljajo organska topila, je treba uporabiti najnižjo možno volumen v mešanici pred - in dokazati, da količina uporabljenega organskega topila ne vpliva na presnovno aktivacijo n - nitrozaminov. |
|
Pozitiven nadzor |
V skladu s smernicami OECD 471 je treba hkrati opraviti sev - Specifične pozitivne kontrole. V prisotnosti S9 je treba kot pozitivne kontrole uporabiti tudi dva N - nitrozamina, za katerega je znano, da sta mutageni. Na voljo N - nitrozamin pozitivni kontrolniki vključujejo: ndma, 1 - ciklopentil - 4 - nitrosopiperazin ndsris。 |
|
Vsa druga priporočila o določitvi AMES bi morala upoštevati smernice OECD 471 |
|
Edinstvena prednost hrčka jeter S9 Fraction
Frakcija jeter S9 HAMSTER je še posebej dragocena pri testiranju AMES zaradi svoje vrhunske sposobnosti aktiviranja nekaterih N - nitrozaminov v primerjavi s podganami jeter S9. Deli tesnejši presnovni profil človeškim jetrnim encimom, zaradi česar je bolj pomemben za oceno človeškega tveganja. Poleg tega hrčka jeter S9 vsebuje višjo raven specifičnih encimov citokroma P450, ki so ključni za bioaktivacijo mutagenov. To ima za posledico izboljšano občutljivost in zmanjšane lažne - negativne stopnje, kar omogoča boljše odkrivanje mutagenov, ki sicer lahko ostanejo neopažene samo s podganami jeter S9.
Zaključek
Medtem ko standardni test AMES ostaja temeljno orodje za oceno mutagenosti, njegove omejitve zahtevajo izboljšave za boljšo natančnost. Izboljšani AMES test, zlasti z vključitvijo frakcije jeter hrčka S9, znatno poveča odkrivanje zapletenih mutagenov, kot so n - nitrozamini, ki premosti vrzel med presnovo bakterij in sesalcev. To napredovanje zagotavlja zanesljivejšo metodo za ocenjevanje potencialnih rakotvornih rakotvornih kancerogenov in podpira boljše regulativne odločitve - sprejemanje.
Ključne besede: N - nitrosamini, NDSRIS, OECD 471, Enhanced Ames test, hrčka jeter S9, encimi citokroma P450, mutacijski test
Čas objave: 2025 - 03 - 12 09:22:09