AMES -toets vir n - nitrosamiene: assessering van mutagenisiteit

Inleiding tot die Ames -toets

Die AMES -toets, ook bekend as bakteriële omgekeerde mutasietoets, word algemeen gebruik vir biologiese toetsing wat die mutageniese potensiaal van chemiese verbindings, insluitend N -nitrosamiene, evalueer. Hierdie toets, wat in die 1970's deur Dr. Bruce Ames ontwikkel is, maak gebruik van spesifieke stamme van die bakterie Salmonella typhimurium wat mutasies dra in gene wat betrokke is by histidien -sintese. Die toets bepaal of 'n stof mutasies in bakteriële DNA kan veroorsaak, wat 'n aanduiding is van potensiële karsinogenisiteit by mense.

Relevansie van die Ames -toets vir n - nitrosamines

N - nitrosamiene is bekend vir hul genotoksiese en karsinogene eienskappe, aangesien dit DNA -skade kan veroorsaak deur alkylering en oksidatiewe spanning. Die AMES -toets is veral nuttig om hul mutageniese effekte op te spoor, aangesien baie Ni -nitrosamiene metaboliese aktivering benodig deur ensiematiese omskakeling om hoogs reaktiewe elektrofiliese tussenprodukte te vorm wat met DNA kan inwerk. Hierdie aktivering vind tipies in die lewer plaas deur sitochroom P450 -ensieme. Om hierdie metaboliese omskakeling in vitro te herhaal, word die toets dikwels uitgevoer met en sonder metaboliese aktivering met behulp van S9 -mengsel, 'n lewerensiemvoorbereiding afgelei van knaagdiere, wat die metabolisme van die soogdier naboots en die opsporing van mutageniese aktiwiteit verhoog.

Metodologie van die Ames -toets

Die standaardprosedure van die Ames -toets behels die volgende stappe:

1. 1. Bereiding van toetsstamme: Salmonella typhimurium -stamme met voor - bestaande mutasies in histidien -sintese -gene word gebruik. Hierdie stamme kan nie groei sonder 'n eksterne histidienbron nie, tensy 'n omgekeerde mutasie die funksie herstel.
2. 2. Blootstelling aan n - nitrosamiene: Die bakteriekultuur word gemeng met die toetsverbinding (n - nitrosamien) op 'n minimale agarplaat wat 'n klein hoeveelheid histidien bevat.
3. 3. Metaboliese aktivering (S9 -mengselaanvulling): Om rekening te hou met metaboliese omskakeling in die menslike liggaam, bevat sommige toetsmonsters S9 -fraksie, 'n ensiematiese uittreksel van die mikrosome van die rotte lewer.
4. 4. Inkubasie en groei: Die plate word 48 uur by 37 ° C geïnkubeer, waardeur bakteriële kolonies kan groei as mutasies voorkom wat histidien -sintese herstel.
5. 5. Kolonietelling en -analise: Die aantal revertante kolonies (bakterieë wat die vermoë om histidien te produseer) word getel en vergelyk met kontroleplate.
6. Interpretasie van resultate

• Positiewe AMES -toets: 'n Beduidende toename in revertante kolonies in vergelyking met die kontrole dui daarop dat die verbinding mutasies veroorsaak, wat mutageniese en potensieel karsinogene eienskappe impliseer.
• Negatiewe AMES -toets: As daar geen noemenswaardige toename waargeneem word nie, is die verbinding waarskynlik nie mutagenies onder die toetsomstandighede nie.
• Dosis - Responsverhouding: Hoër dosisse wat lei tot verhoogde mutasietempo versterk die bewyse van mutagenisiteit.

Konklusie

Die AMES -toets is 'n vinnige en koste - Effektiewe metode om die mutagenisiteit van n - nitrosamiene te beoordeel. Gegewe hul assosiasie met kanker, is die identifisering van hul mutageniese eienskappe deur middel van hierdie toets van kardinale belang vir regulatoriese beheer en risikobepaling. Hierdie toets bly 'n hoeksteen in toksikologiese sifting en evaluering van chemiese veiligheid.

Sleutelwoorde: N - Nitrosamines, NDSRIS, OECD 471, Verbeterde Ames -toets, Hamster Liver S9, Cytochrome P450 Enzymes, Mutation Test