N-Nitrosamines కోసం అమెస్ టెస్ట్: మ్యూటాజెనిసిటీని అంచనా వేయడం

ఎయిమ్స్ టెస్ట్ పరిచయం

బాక్టీరియల్ రివర్స్ మ్యుటేషన్ టెస్ట్ అని కూడా పిలువబడే అమెస్ పరీక్ష అనేది N-Nitrosaminesతో సహా రసాయన సమ్మేళనాల యొక్క ఉత్పరివర్తన సంభావ్యతను అంచనా వేసే జీవశాస్త్ర పరీక్ష కోసం విస్తృతంగా ఉపయోగించబడుతుంది. 1970లలో డాక్టర్ బ్రూస్ అమెస్ చే అభివృద్ధి చేయబడింది, ఈ పరీక్ష హిస్టిడిన్ సంశ్లేషణలో పాల్గొన్న జన్యువులలో ఉత్పరివర్తనాలను మోసే బ్యాక్టీరియా సాల్మొనెల్లా టైఫిమూరియం యొక్క నిర్దిష్ట జాతులను ఉపయోగించుకుంటుంది. ఒక పదార్ధం బ్యాక్టీరియా DNAలో ఉత్పరివర్తనలకు కారణమవుతుందా లేదా అనేది పరీక్ష నిర్ణయిస్తుంది, ఇది మానవులలో సంభావ్య క్యాన్సర్ కారకాల సూచనను అందిస్తుంది.

N-Nitrosamines కోసం Ames పరీక్ష యొక్క ఔచిత్యం

N-నైట్రోసమైన్‌లు వాటి జెనోటాక్సిక్ మరియు కార్సినోజెనిక్ లక్షణాలకు ప్రసిద్ధి చెందాయి, ఎందుకంటే అవి ఆల్కైలేషన్ మరియు ఆక్సీకరణ ఒత్తిడి ద్వారా DNA నష్టాన్ని ప్రేరేపిస్తాయి. అమెస్ పరీక్ష వాటి ఉత్పరివర్తన ప్రభావాలను గుర్తించడంలో ప్రత్యేకంగా ఉపయోగపడుతుంది, అనేక N-నైట్రోసమైన్‌లు DNAతో సంకర్షణ చెందగల అధిక రియాక్టివ్ ఎలక్ట్రోఫిలిక్ మధ్యవర్తులను రూపొందించడానికి ఎంజైమాటిక్ మార్పిడి ద్వారా జీవక్రియ క్రియాశీలతను అవసరం. ఈ క్రియాశీలత సాధారణంగా కాలేయంలో సైటోక్రోమ్ P450 ఎంజైమ్‌ల ద్వారా సంభవిస్తుంది. విట్రోలో ఈ జీవక్రియ మార్పిడిని పునరావృతం చేయడానికి, ఎలుకల నుండి తీసుకోబడిన కాలేయ ఎంజైమ్ తయారీ అయిన S9 మిక్స్‌ని ఉపయోగించి జీవక్రియ క్రియాశీలతతో మరియు లేకుండా పరీక్ష తరచుగా నిర్వహించబడుతుంది, ఇది క్షీరదాల జీవక్రియను అనుకరిస్తుంది మరియు ఉత్పరివర్తన చర్యను గుర్తించడాన్ని పెంచుతుంది.

ఎమెస్ టెస్ట్ యొక్క మెథడాలజీ

Ames పరీక్ష యొక్క ప్రామాణిక విధానం క్రింది దశలను కలిగి ఉంటుంది:

1. 1. టెస్ట్ స్ట్రెయిన్‌ల తయారీ: హిస్టిడిన్ సంశ్లేషణ జన్యువులలో ఇప్పటికే ఉన్న ఉత్పరివర్తనాలతో సాల్మొనెల్లా టైఫిమూరియం జాతులు ఉపయోగించబడతాయి. రివర్స్ మ్యుటేషన్ ఫంక్షన్‌ను పునరుద్ధరించకపోతే ఈ జాతులు బాహ్య హిస్టిడిన్ మూలం లేకుండా పెరగవు.
2. 2. N-Nitrosamines కు బహిర్గతం: బ్యాక్టీరియా సంస్కృతిని పరీక్ష సమ్మేళనం (N-Nitrosamine)తో కొద్ది మొత్తంలో హిస్టిడిన్ కలిగి ఉండే కనిష్ట అగర్ ప్లేట్‌లో కలుపుతారు.
3. 3. మెటబాలిక్ యాక్టివేషన్ (S9 మిక్స్ అడిషన్): మానవ శరీరంలో జీవక్రియ మార్పిడిని లెక్కించడానికి, కొన్ని పరీక్ష నమూనాలలో ఎలుక కాలేయ మైక్రోసోమ్‌ల నుండి ఎంజైమాటిక్ సారం S9 భిన్నం ఉంటుంది.
4. 4. పొదిగే మరియు పెరుగుదల: ప్లేట్లు 37 ° C వద్ద 48 గంటల పాటు పొదిగేవి, హిస్టిడిన్ సంశ్లేషణను పునరుద్ధరించే ఉత్పరివర్తనలు సంభవించినట్లయితే బ్యాక్టీరియా కాలనీలు పెరుగుతాయి.
5. 5. కాలనీ లెక్కింపు మరియు విశ్లేషణ: రివర్టెంట్ కాలనీల సంఖ్య (హిస్టిడిన్ ఉత్పత్తి చేసే సామర్థ్యాన్ని తిరిగి పొందిన బ్యాక్టీరియా) లెక్కించబడుతుంది మరియు కంట్రోల్ ప్లేట్‌లతో పోల్చబడుతుంది.
6. ఫలితాల వివరణ

• సానుకూల అమెస్ టెస్ట్: నియంత్రణతో పోల్చితే రివర్టెంట్ కాలనీలలో గణనీయమైన పెరుగుదల సమ్మేళనం ఉత్పరివర్తనాలను ప్రేరేపిస్తుందని సూచిస్తుంది, ఇది ఉత్పరివర్తన మరియు సంభావ్య క్యాన్సర్ లక్షణాలను సూచిస్తుంది.
• ప్రతికూల అమెస్ పరీక్ష: గణనీయమైన పెరుగుదల గమనించబడకపోతే, పరీక్ష పరిస్థితులలో సమ్మేళనం నాన్-మ్యూటాజెనిక్‌గా ఉంటుంది.
• మోతాదు-ప్రతిస్పందన సంబంధం: మ్యుటేషన్ రేట్లను పెంచడానికి దారితీసే అధిక మోతాదులు మ్యుటేజెనిసిటీకి సంబంధించిన సాక్ష్యాలను బలపరుస్తాయి.

తీర్మానం

అమెస్ పరీక్ష అనేది N-Nitrosamines యొక్క ఉత్పరివర్తనను అంచనా వేయడానికి వేగవంతమైన మరియు ఖర్చుతో కూడిన-ప్రభావవంతమైన పద్ధతి. క్యాన్సర్‌తో వారి అనుబంధాన్ని బట్టి, నియంత్రణ నియంత్రణ మరియు ప్రమాద అంచనా కోసం ఈ పరీక్ష ద్వారా వారి ఉత్పరివర్తన లక్షణాలను గుర్తించడం చాలా ముఖ్యం. టాక్సికాలజికల్ స్క్రీనింగ్ మరియు రసాయన భద్రత మూల్యాంకనంలో ఈ పరీక్ష మూలస్తంభంగా ఉంది.

కీవర్డ్లు: N-Nitrosamines, NDSRIs, OECD 471, మెరుగైన అమెస్ పరీక్ష, హాంస్టర్ లివర్ S9, సైటోక్రోమ్ P450 ఎంజైమ్‌లు, మ్యుటేషన్ టెస్ట్