Įvadas į Ames testą
Ames testas, taip pat žinomas kaip bakterijų atvirkštinės mutacijos testas, yra plačiai naudojamas biologiniam tyrimui, kuris įvertina cheminių junginių, įskaitant N-nitrozaminus, mutageninį potencialą. Šis testas, kurį aštuntajame dešimtmetyje sukūrė daktaras Bruce'as Amesas, naudoja specifines Salmonella typhimurium bakterijos padermes, kurios turi genų, dalyvaujančių histidino sintezėje, mutacijas. Bandymu nustatoma, ar medžiaga gali sukelti bakterijų DNR mutacijas, o tai rodo galimą kancerogeniškumą žmonėms.
Ames testo svarba N-nitrozaminams
N-Nitrozaminai yra žinomi dėl savo genotoksinių ir kancerogeninių savybių, nes jie gali sukelti DNR pažeidimus dėl alkilinimo ir oksidacinio streso. Ames testas yra ypač naudingas nustatant jų mutageninį poveikį, nes daugeliui N-nitrozaminų reikalingas metabolinis aktyvinimas per fermentinį konversiją, kad susidarytų labai reaktyvūs elektrofiliniai tarpiniai produktai, galintys sąveikauti su DNR. Šis aktyvavimas paprastai vyksta kepenyse per citochromo P450 fermentus. Norint pakartoti šią metabolinę konversiją in vitro, bandymas dažnai atliekamas su metaboliniu aktyvavimu ir be jo, naudojant S9 mišinį – kepenų fermentų preparatą, gautą iš graužikų, kuris imituoja žinduolių metabolizmą ir pagerina mutageninio aktyvumo nustatymą.
Ames testo metodika
Standartinė Ames testo procedūra apima šiuos veiksmus:
- 1. Bandomųjų padermių paruošimas. Naudojamos Salmonella typhimurium padermės su jau egzistuojančiomis histidino sintezės genų mutacijomis. Šios padermės negali augti be išorinio histidino šaltinio, nebent atvirkštinė mutacija atstato funkciją.
- 2. N-nitrozaminų poveikis: bakterijų kultūra sumaišoma su tiriamuoju junginiu (N-nitrozaminu) ant minimalaus agaro plokštelės, kurioje yra nedidelis histidino kiekis.
- 3. Metabolinis aktyvinimas (S9 mišinio papildymas): siekiant atsižvelgti į metabolinę konversiją žmogaus organizme, kai kuriuose tiriamuosiuose mėginiuose yra S9 frakcija, fermentinis ekstraktas iš žiurkės kepenų mikrosomų.
- 4. Inkubavimas ir augimas: plokštelės inkubuojamos 37°C temperatūroje 48 valandas, leidžiant augti bakterijų kolonijoms, jei atsiranda mutacijų, kurios atkuria histidino sintezę.
- 5. Kolonijų skaičiavimas ir analizė: Revertantinių kolonijų (bakterijų, kurios atgavo gebėjimą gaminti histidiną) skaičius suskaičiuojamas ir lyginamas su kontrolinėmis plokštelėmis.
- Rezultatų interpretavimas
- Teigiamas Ames testas: reikšmingas revertantinių kolonijų padidėjimas, palyginti su kontrole, rodo, kad junginys sukelia mutacijas, o tai reiškia mutagenines ir potencialiai kancerogenines savybes.
- Neigiamas Ames testas: jei nepastebėtas reikšmingas padidėjimas, bandymo sąlygomis junginys greičiausiai nėra mutageniškas.
- Dozės ir atsako santykis: Didesnės dozės, dėl kurių padidėja mutacijų dažnis, sustiprina mutageniškumo įrodymus.
Išvada
Ames testas yra greitas ir ekonomiškas N-nitrozaminų mutageniškumo įvertinimo metodas. Atsižvelgiant į jų ryšį su vėžiu, jų mutageninių savybių nustatymas atliekant šį tyrimą yra labai svarbus reguliavimo kontrolei ir rizikos įvertinimui. Šis bandymas išlieka kertiniu toksikologinės patikros ir cheminės saugos vertinimo akmeniu.
Raktiniai žodžiai: N-nitrozaminai, NDSRI, OECD 471, sustiprintas Ames testas, žiurkėno kepenys S9, citochromo P450 fermentai, mutacijų testas
Įrašo laikas: 2025-03-11 09:16:10