N-Nitrosamines üçün Ames Testi: Mutagenliyin qiymətləndirilməsi

Ames Testinə giriş

Bakterial Əks Mutasiya Testi kimi də tanınan Ames testi N-Nitrosaminlər də daxil olmaqla kimyəvi birləşmələrin mutagen potensialını qiymətləndirən bioloji analiz üçün geniş istifadə olunur. 1970-ci illərdə Dr. Bruce Ames tərəfindən hazırlanmış bu test histidin sintezində iştirak edən genlərdə mutasiyaları daşıyan Salmonella typhimurium bakteriyasının spesifik suşlarından istifadə edir. Test bir maddənin bakterial DNT-də mutasiyalara səbəb olub-olmadığını müəyyən edir və insanlarda potensial kanserogenliyin göstəricisini təmin edir.

N - Nitrozaminlər üçün Ames Testinin aktuallığı

N-Nitrosaminlər genotoksik və kanserogen xüsusiyyətləri ilə tanınır, çünki alkilləşmə və oksidləşdirici stress vasitəsilə DNT zədələnməsinə səbəb ola bilər. Ames testi onların mutagen təsirlərinin aşkarlanmasında xüsusilə faydalıdır, çünki bir çox N-Nitrosaminlər DNT ilə qarşılıqlı əlaqə qura bilən yüksək reaktiv elektrofilik ara maddələr yaratmaq üçün fermentativ çevrilmə yolu ilə metabolik aktivləşdirmə tələb edir. Bu aktivləşdirmə adətən qaraciyərdə sitoxrom P450 fermentləri vasitəsilə baş verir. Bu metabolik çevrilməni in vitro təkrarlamaq üçün test tez-tez məməlilərin metabolizmasını təqlid edən və mutagen aktivliyin aşkarlanmasını gücləndirən gəmiricilərdən alınan qaraciyər fermenti preparatı olan S9 qarışığından istifadə etməklə metabolik aktivləşdirmə ilə və ya olmadan aparılır.

Ames Testinin Metodologiyası

Ames testinin standart proseduru aşağıdakı addımları əhatə edir:

1. 1. Test Ştammlarının Hazırlanması: Histidin sintezi genlərində əvvəlcədən mövcud mutasiyalara malik Salmonella typhimurium suşlarından istifadə edilir. Əks mutasiya funksiyanı bərpa etmədikcə, bu suşlar xarici histidin mənbəyi olmadan inkişaf edə bilməz.
2. 2. N-Nitrosaminlərə məruz qalma: Bakteriya kulturası az miqdarda histidin olan minimal agar boşqabında sınaq birləşməsi (N-Nitrosamin) ilə qarışdırılır.
3. 3. Metabolik Aktivləşdirmə (S9 Qarışıq Əlavəsi): İnsan orqanizmində metabolik çevrilməni nəzərə almaq üçün bəzi sınaq nümunələrinə siçovulların qaraciyər mikrosomlarından fermentativ çıxarış olan S9 fraksiya daxildir.
4. 4. İnkubasiya və böyümə: Plitələr histidin sintezini bərpa edən mutasiyalar baş verərsə, bakteriya koloniyalarının böyüməsinə imkan verən 48 saat ərzində 37°C-də inkubasiya edilir.
5. 5. Koloniyaların sayılması və təhlili: Geri dönən koloniyaların (histidin istehsal etmək qabiliyyətini bərpa etmiş bakteriyalar) sayı sayılır və nəzarət lövhələri ilə müqayisə edilir.
6. Nəticələrin şərhi

• Müsbət Ames Testi: Nəzarətlə müqayisədə geri dönən koloniyaların əhəmiyyətli dərəcədə artması birləşmənin mutagen və potensial kanserogen xüsusiyyətləri nəzərdə tutan mutasiyalara səbəb olduğunu göstərir.
• Mənfi Ames Testi: Əhəmiyyətli artım müşahidə olunmazsa, test şərtləri altında birləşmənin mutagen olmadığı ehtimal edilir.
• Doza - Cavab Əlaqəsi: Artan mutasiya nisbətlərinə səbəb olan daha yüksək dozalar mutagenliyin sübutunu gücləndirir.

Nəticə

Ames testi N-Nitrosaminlərin mutagenliyini qiymətləndirmək üçün sürətli və sərfəli üsuldur. Onların xərçənglə əlaqəsini nəzərə alaraq, bu analiz vasitəsilə onların mutagen xüsusiyyətlərinin müəyyən edilməsi tənzimləyici nəzarət və riskin qiymətləndirilməsi üçün çox vacibdir. Bu test toksikoloji müayinə və kimyəvi təhlükəsizliyin qiymətləndirilməsində təməl daşı olaraq qalır.

Açar sözlər: N-Nitrosamines, NDSRIs, OECD 471, Enhanced Ames testi, Hamster qaraciyər S9, Cytochrome P450 fermentləri, Mutasiya Testi