ايمس ٽيسٽ لاءِ N-Nitrosamines: Mutagenicity جو اندازو لڳائڻ

ايمس ٽيسٽ جو تعارف

ايمس ٽيسٽ، جنهن کي بيڪٽيريل ريورس ميوٽيشن ٽيسٽ پڻ سڏيو ويندو آهي، هڪ وڏي پيماني تي حياتياتي امتحان لاءِ استعمال ڪيو ويندو آهي جيڪو ڪيميائي مرڪب جي ميوٽيجينڪ صلاحيت جو جائزو وٺندو آهي، بشمول N-Nitrosamines. 1970 جي ڏهاڪي ۾ ڊاڪٽر بروس ايمز پاران تيار ڪيل، هي ٽيسٽ جراثيم سلمونلا ٽائيفيموريم جي مخصوص اسٽرين کي استعمال ڪري ٿو جيڪي هسٽيڊائن جي جوڙجڪ ۾ شامل جين ۾ ميوٽيشنز کي کڻندا آهن. ٽيسٽ اهو طئي ڪري ٿو ته ڇا هڪ مادو بيڪٽيريا ڊي اين اي ۾ ميوٽيشنز جو سبب بڻجي سگهي ٿو، انسانن ۾ امڪاني ڪارڪينوجنسي جو اشارو مهيا ڪري ٿو.

N-Nitrosamines لاءِ ايمس ٽيسٽ جي مطابقت

N-Nitrosamines سڃاتل آھن انھن جي جينوٽڪسڪ ۽ ڪارڪينجينڪ ملڪيتن لاءِ، ڇاڪاڻ ته اھي الڪيليشن ۽ آڪسائيڊائٽي دٻاءَ ذريعي ڊي اين اي کي نقصان پھچائي سگھن ٿيون. ايمز ٽيسٽ خاص طور تي انهن جي ميوٽيجينڪ اثرات کي ڳولڻ ۾ ڪارائتو آهي، ڇاڪاڻ ته ڪيتريون ئي N-Nitrosamines کي ميٽابولڪ چالو ڪرڻ جي ضرورت هوندي آهي اينزيميٽڪ ڪنورشن ذريعي، انتهائي رد عمل واري اليڪٽرروفيلڪ وچولي ٺاهڻ لاءِ جيڪي ڊي اين اي سان رابطو ڪرڻ جي قابل هوندا آهن. هي چالو عام طور تي جگر ۾ cytochrome P450 enzymes ذريعي ٿئي ٿو. ويٽرو ۾ هن ميٽابولڪ تبادلي کي نقل ڪرڻ لاءِ، ٽيسٽ اڪثر ڪري ميٽابولڪ ايڪٽيويشن سان ۽ بغير S9 مڪس استعمال ڪندي ڪيو ويندو آهي، هڪ جگر اينزائم تيار ڪرڻ، جيڪو ڪهاڙين مان نڪتل آهي، جيڪو ممالين جي ميٽابولزم کي نقل ڪري ٿو ۽ ميوٽيجنڪ سرگرمي جي نشاندهي کي وڌائي ٿو.

ايمس ٽيسٽ جو طريقو

ايمس ٽيسٽ جي معياري طريقي ۾ هيٺيان قدم شامل آهن:

1. 1. ٽيسٽ اسٽرين جي تياري: سلمونلا ٽائيفيموريم اسٽرين سان گڏ اڳي-موجوده ميوٽيشنز هسٽيڊائن سنٿيسس جين ۾ استعمال ڪيا ويندا آهن. اهي strains ڪنهن خارجي هسٽيڊائن جي ماخذ کان سواءِ اڀري نٿا سگهن جيستائين ڪو ريورس ميوٽيشن ڪم بحال نه ڪري.
2. 2. N-Nitrosamines جي نمائش: بيڪٽيريا ڪلچر کي ٽيسٽ مرڪب (N-Nitrosamine) سان ملايو ويندو آھي گھٽ ۾ گھٽ ايگر پليٽ تي جنھن ۾ ھسٽيڊائن جي گھٽ مقدار ھوندي آھي.
3. 3. Metabolic Activation (S9 Mix Addition): انساني جسم ۾ ميٽابولڪ تبديليءَ لاءِ اڪائونٽ ڪرڻ لاءِ، ڪجھ ٽيسٽ نمونن ۾ S9 فريڪشن شامل آھي، ھڪڙو اينزيميٽڪ نڪتل rat liver microsomes مان.
4. 4. انڪيوبيشن ۽ واڌارو: پليٽون 37 ڊگري سينٽي گريڊ تي 48 ڪلاڪن لاءِ سينگاريون وينديون آهن، ان ڪري بيڪٽيريا ڪالونيون وڌڻ جي اجازت ڏين ٿيون جيڪڏهن ميوٽيشن ٿئي ٿي ته هسٽيڊائن جي ٺهڻ کي بحال ڪري ٿي.
5. 5. ڪالوني جي ڳڻپ ۽ تجزيو: ريٽرنٽينٽ ڪالونين جو تعداد (بيڪٽيريا جيڪي هسٽيڊائن پيدا ڪرڻ جي صلاحيت حاصل ڪري چڪا آهن) ڳڻيا ويا آهن ۽ ڪنٽرول پليٽ جي مقابلي ۾.
6. نتيجن جي تشريح

• مثبت ايمز ٽيسٽ: ڪنٽرول جي مقابلي ۾ ريٽرنٽينٽ ڪالونيز ۾ هڪ اهم اضافو مشورو ڏئي ٿو ته مرڪب ميوٽيشنز کي جنم ڏئي ٿو، ميوٽيشنڪ ۽ امڪاني طور تي ڪارڪينوجنڪ ملڪيت جو مطلب.
• ناڪاري ايمز ٽيسٽ: جيڪڏهن ڪو خاص واڌارو نه ڏٺو وڃي، ته مرڪب ممڪن آهي غير-ميوٽاجينڪ ٽيسٽ جي حالتن هيٺ.
• دوز

نتيجو

ايمس ٽيسٽ هڪ تيز ۽ قيمتي آهي-مؤثر طريقو N-Nitrosamines جي mutagenicity جو اندازو لڳائڻ لاءِ. انهن جي وابستگي کي ڪينسر سان گڏ، انهن جي ميوٽيجنڪ ملڪيت جي سڃاڻپ هن جائزي ذريعي ريگيوليٽري ڪنٽرول ۽ خطري جي تشخيص لاء اهم آهي. هي امتحان زهرياتي اسڪريننگ ۽ ڪيميائي حفاظت جي تشخيص ۾ بنيادي بنياد رهي ٿو.

Keywords: N-Nitrosamines, NDSRIs, OECD 471, Enhanced Ames test, Hamster liver S9, Cytochrome P450 enzymes, ميوٽيشن ٽيسٽ