ایمز ٹیسٹ برائے N-Nitrosamines: Mutagenicity کا اندازہ لگانا

ایمز ٹیسٹ کا تعارف

ایمز ٹیسٹ، جسے بیکٹیریل ریورس میوٹیشن ٹیسٹ کے نام سے بھی جانا جاتا ہے، حیاتیاتی پرکھ کے لیے وسیع پیمانے پر استعمال کیا جاتا ہے جو N-Nitrosamines سمیت کیمیائی مرکبات کی mutagenic صلاحیت کا جائزہ لیتا ہے۔ 1970 کی دہائی میں ڈاکٹر بروس ایمز کے ذریعہ تیار کردہ، یہ ٹیسٹ بیکٹیریم سالمونیلا ٹائیفیموریم کے مخصوص تناؤ کا استعمال کرتا ہے جو ہسٹائڈائن کی ترکیب میں شامل جینوں میں تغیرات لاتے ہیں۔ ٹیسٹ اس بات کا تعین کرتا ہے کہ آیا کوئی مادہ بیکٹیریل ڈی این اے میں تغیرات کا سبب بن سکتا ہے، جو انسانوں میں ممکنہ سرطان پیدا کرنے کا اشارہ فراہم کرتا ہے۔

N-Nitrosamines کے لیے Ames ٹیسٹ کی مطابقت

این Ames ٹیسٹ خاص طور پر ان کے mutagenic اثرات کا پتہ لگانے میں مفید ہے، کیونکہ بہت سے N-Nitrosamines کو انزیمیٹک کنورژن کے ذریعے میٹابولک ایکٹیویشن کی ضرورت ہوتی ہے تاکہ DNA کے ساتھ تعامل کرنے کے قابل انتہائی رد عمل والے الیکٹرو فیلک انٹرمیڈیٹس بنائے۔ یہ ایکٹیویشن عام طور پر جگر میں سائٹوکوم P450 انزائمز کے ذریعے ہوتی ہے۔ اس میٹابولک تبدیلی کو وٹرو میں نقل کرنے کے لیے، ٹیسٹ اکثر S9 مکس کا استعمال کرتے ہوئے میٹابولک ایکٹیویشن کے ساتھ اور اس کے بغیر کیا جاتا ہے، جو چوہوں سے اخذ کردہ جگر کے انزائم کی تیاری ہے، جو ممالیہ کے میٹابولزم کی نقل کرتا ہے اور mutagenic سرگرمی کی کھوج کو بڑھاتا ہے۔

ایمز ٹیسٹ کا طریقہ کار

ایمز ٹیسٹ کے معیاری طریقہ کار میں درج ذیل اقدامات شامل ہیں:

1. 1. ٹیسٹ اسٹرینز کی تیاری: سالمونیلا ٹائیفیموریم اسٹرینز جس میں ہسٹائڈائن کی ترکیب کے جینز میں پہلے سے موجود تغیرات موجود ہیں۔ یہ تناؤ بیرونی ہسٹائڈائن کے ذریعہ کے بغیر نہیں بڑھ سکتے جب تک کہ ایک الٹا اتپریورتن کام کو بحال نہ کرے۔
2. 2. N-Nitrosamines کی نمائش: بیکٹیریل کلچر کو ٹیسٹ کمپاؤنڈ (N-Nitrosamine) کے ساتھ ایک کم سے کم ایگر پلیٹ پر ملایا جاتا ہے جس میں ہسٹائڈائن کی تھوڑی مقدار ہوتی ہے۔
3. 3. میٹابولک ایکٹیویشن (S9 مکس ایڈیشن): انسانی جسم میں میٹابولک تبدیلی کے حساب سے، کچھ ٹیسٹ کے نمونوں میں S9 فریکشن شامل ہے، جو چوہے کے جگر کے مائکروسومس سے ایک انزیمیٹک نچوڑ ہے۔
4. 4. انکیوبیشن اور بڑھوتری: پلیٹوں کو 37°C پر 48 گھنٹے تک انکیوبیشن کیا جاتا ہے، جس سے بیکٹیریل کالونیوں کو بڑھنے کا موقع ملتا ہے اگر ہسٹائڈائن کی ترکیب کو بحال کرنے والے تغیرات واقع ہوں۔
5. 5. کالونی کی گنتی اور تجزیہ: ریورٹنٹ کالونیوں کی تعداد (بیکٹیریا جنہوں نے ہسٹائڈائن پیدا کرنے کی صلاحیت دوبارہ حاصل کی) کی گنتی اور ان کا موازنہ کنٹرول پلیٹوں سے کیا جاتا ہے۔
6. نتائج کی تشریح

• مثبت ایمز ٹیسٹ: کنٹرول کے مقابلے ریورٹنٹ کالونیوں میں نمایاں اضافہ بتاتا ہے کہ کمپاؤنڈ اتپریورتنوں کو اکساتا ہے، جس سے میوٹیجینک اور ممکنہ طور پر سرطان پیدا کرنے والی خصوصیات ہوتی ہیں۔
• منفی ایمس ٹیسٹ: اگر کوئی قابل ذکر اضافہ نہیں دیکھا جاتا ہے، تو کمپاؤنڈ ممکنہ طور پر ٹیسٹ کی شرائط کے تحت غیر متغیر ہے۔
• ڈوز

نتیجہ

ایمز ٹیسٹ N-Nitrosamines کی تبدیلی کا اندازہ لگانے کے لیے ایک تیز رفتار اور لاگت سے موثر طریقہ ہے۔ کینسر کے ساتھ ان کی وابستگی کو دیکھتے ہوئے، اس پرکھ کے ذریعے ان کی mutagenic خصوصیات کی شناخت ریگولیٹری کنٹرول اور خطرے کی تشخیص کے لیے بہت ضروری ہے۔ یہ ٹیسٹ زہریلے اسکریننگ اور کیمیائی حفاظت کی تشخیص میں ایک بنیاد بنا ہوا ہے۔

مطلوبہ الفاظ: این