Увод у Ејмсов тест
Амесов тест, такође познат као Бактеријски тест реверзне мутације, је широко коришћен за биолошки тест који процењује мутагени потенцијал хемијских једињења, укључујући Н-Нитрозамине. Развио га је др Брус Ејмс 1970-их, овај тест користи специфичне сојеве бактерије Салмонелла типхимуриум који носе мутације у генима укљученим у синтезу хистидина. Тест утврђује да ли супстанца може да изазове мутације у бактеријској ДНК, што указује на потенцијалну канцерогеност код људи.
Релевантност Амесовог теста за Н-нитрозамине
Н-Нитрозамини су познати по својим генотоксичним и канцерогеним својствима, јер могу изазвати оштећење ДНК кроз алкилацију и оксидативни стрес. Ејмсов тест је посебно користан у откривању њихових мутагених ефеката, пошто многи Н-Нитрозамини захтевају метаболичку активацију путем ензимске конверзије да би се формирали високо реактивни електрофилни интермедијери способни за интеракцију са ДНК. Ова активација се обично дешава у јетри преко ензима цитокрома П450. Да би се реплицирала ова метаболичка конверзија ин витро, тест се често спроводи са и без метаболичке активације коришћењем С9 мешавине, препарата ензима јетре добијеног од глодара, који опонаша метаболизам сисара и побољшава откривање мутагене активности.
Методологија Ејмсовог теста
Стандардна процедура Амес теста укључује следеће кораке:
- 1. Припрема тестних сојева: Користе се сојеви Салмонелла типхимуриум са већ постојећим мутацијама у генима за синтезу хистидина. Ови сојеви не могу расти без екстерног извора хистидина осим ако обрнута мутација не обнови функцију.
- 2. Излагање Н-Нитрозаминима: Бактеријска култура се помеша са тест једињењем (Н-Нитрозамин) на минималној агар плочи која садржи малу количину хистидина.
- 3. Метаболичка активација (С9 микс додатак): Да би се узела у обзир метаболичка конверзија у људском телу, неки тестни узорци укључују С9 фракцију, ензимски екстракт из микрозома јетре пацова.
- 4. Инкубација и раст: Плоче се инкубирају на 37°Ц током 48 сати, омогућавајући бактеријским колонијама да расту ако се појаве мутације које обнављају синтезу хистидина.
- 5. Бројање и анализа колонија: Број колонија које се враћају (бактерије које су повратиле способност да производе хистидин) се броји и упоређује са контролним плочама.
- Тумачење резултата
- Позитиван Ејмсов тест: Значајно повећање ревертантних колонија у поређењу са контролом сугерише да једињење индукује мутације, што имплицира мутагена и потенцијално канцерогена својства.
- Негативан Амесов тест: Ако се не примећује значајно повећање, једињење вероватно није-мутагено под условима теста.
- Однос доза-одговор: Више дозе које доводе до повећане стопе мутације јачају доказе о мутагености.
Закључак
Амесов тест је брза и исплатива метода за процену мутагености Н-нитрозамина. С обзиром на њихову повезаност са раком, идентификација њихових мутагених својстава кроз овај тест је кључна за регулаторну контролу и процену ризика. Овај тест остаје камен темељац у токсиколошком скринингу и процени хемијске безбедности.
Кључне речи: Н-Нитрозамини, НДСРИ, ОЕЦД 471, Енханцед Амес тест, јетра хрчка С9, ензими цитокрома П450, тест мутације
Пост тиме: 2025-03-11 09:16:10