N-Nitrosamines को लागि एम्स टेस्ट: Mutagenicity को आकलन

एम्स टेस्टको परिचय

Ames परीक्षण, जसलाई ब्याक्टेरियल रिभर्स म्युटेसन टेस्ट पनि भनिन्छ, जैविक परखको लागि व्यापक रूपमा प्रयोग गरिन्छ जसले N-Nitrosamines सहित रासायनिक यौगिकहरूको उत्परिवर्तनीय क्षमताको मूल्याङ्कन गर्दछ। १९७० को दशकमा डा. ब्रुस एम्सद्वारा विकास गरिएको, यो परीक्षणले हिस्टिडाइन संश्लेषणमा संलग्न जीनहरूमा उत्परिवर्तन गर्ने ब्याक्टेरिया साल्मोनेला टाइफिमुरियमको विशेष प्रकारको प्रयोग गर्छ। परीक्षणले मानिसमा सम्भावित कार्सिनोजेनिसिटीको संकेत प्रदान गर्दै ब्याक्टेरियाको डीएनएमा पदार्थले उत्परिवर्तन गराउन सक्छ कि भनेर निर्धारण गर्छ।

N-Nitrosamines को लागि एम्स टेस्ट को प्रासंगिकता

N-Nitrosamines तिनीहरूको genotoxic र carcinogenic गुणहरूका लागि परिचित छन्, किनकि तिनीहरूले अल्किलेसन र अक्सिडेटिभ तनाव मार्फत DNA क्षति पुर्‍याउन सक्छन्। एम्स परीक्षण विशेष गरी तिनीहरूको म्युटेजेनिक प्रभावहरू पत्ता लगाउन उपयोगी छ, किनकि धेरै N-Nitrosamines लाई एन्जाइमेटिक रूपान्तरण मार्फत चयापचय सक्रियता चाहिन्छ उच्च प्रतिक्रियाशील इलेक्ट्रोफिलिक मध्यवर्ती DNA सँग अन्तरक्रिया गर्न सक्षम हुन। यो सक्रियता सामान्यतया कलेजोमा साइटोक्रोम P450 इन्जाइमहरू मार्फत हुन्छ। यस मेटाबोलिक रूपान्तरणलाई भिट्रोमा नक्कल गर्न, परीक्षण प्रायः S9 मिक्स प्रयोग गरेर मेटाबोलिक सक्रियताको साथ र बिना सञ्चालन गरिन्छ, कृन्तकहरूबाट व्युत्पन्न कलेजो इन्जाइम तयारी, जसले स्तनधारी चयापचयको नक्कल गर्दछ र म्युटेजेनिक गतिविधिको पहिचानलाई बढाउँछ।

एम्स टेस्ट को विधि

एम्स परीक्षणको मानक प्रक्रियाले निम्न चरणहरू समावेश गर्दछ:

1. 1. परीक्षण स्ट्रेनको तयारी: हिस्टिडाइन संश्लेषण जीनमा पहिले देखि अवस्थित उत्परिवर्तन भएको साल्मोनेला टाइफिमुरियम स्ट्रेनहरू प्रयोग गरिन्छ। यी स्ट्रेनहरू बाह्य हिस्टिडाइन स्रोत बिना बढ्न सक्दैन जबसम्म रिभर्स उत्परिवर्तनले कार्य पुनर्स्थापित गर्दैन।
2. 2. N-Nitrosamines को एक्सपोजर: ब्याक्टेरियल कल्चरलाई परीक्षण यौगिक (N-Nitrosamine) सँग थोरै मात्रामा हिस्टिडाइन भएको न्यूनतम अगर प्लेटमा मिसाइन्छ।
3. 3. मेटाबोलिक एक्टिभेसन (S9 मिक्स एडिशन): मानव शरीरमा मेटाबोलिक रूपान्तरणको लागि खातामा, केहि परीक्षण नमूनाहरूमा S9 अंश समावेश छ, मुसाको कलेजो माइक्रोसोमहरूबाट इन्जाइम्याटिक निकासी।
4. 4. इन्क्युबेशन र बृद्धि: प्लेटहरू 48 घण्टाको लागि 37 डिग्री सेल्सियसमा इन्क्युबेटेड हुन्छन्, यदि हिस्टिडाइन संश्लेषण पुनर्स्थापना गर्ने उत्परिवर्तनहरू भएमा ब्याक्टेरियाको उपनिवेशहरू बढ्न अनुमति दिन्छ।
5. 5. कोलोनी गणना र विश्लेषण: रिभर्टन्ट कोलोनीहरूको संख्या (ब्याक्टेरिया जसले हिस्टिडाइन उत्पादन गर्ने क्षमता प्राप्त गर्यो) गणना गरिन्छ र नियन्त्रण प्लेटहरूसँग तुलना गरिन्छ।
6. परिणामहरूको व्याख्या

• सकारात्मक एम्स परीक्षण: नियन्त्रणको तुलनामा रिभर्ट्यान्ट कोलोनीहरूमा उल्लेखनीय वृद्धिले कम्पाउन्डले उत्परिवर्तनलाई उत्प्रेरित गर्छ, म्युटेजेनिक र सम्भावित रूपमा कार्सिनोजेनिक गुणहरूलाई संकेत गर्दछ।
• नेगेटिभ एम्स टेस्ट: यदि कुनै महत्त्वपूर्ण वृद्धि देखिएन भने, कम्पाउन्ड सम्भवतः परीक्षण अवस्थाहरूमा गैर-म्युटेजेनिक हुन्छ।
• खुराक

निष्कर्ष

एम्स परीक्षण N-Nitrosamines को mutagenicity मूल्याङ्कन गर्नको लागि द्रुत र लागत-प्रभावी विधि हो। क्यान्सरसँग उनीहरूको सम्बन्धलाई ध्यानमा राख्दै, यस परख मार्फत तिनीहरूको उत्परिवर्तनीय गुणहरू पहिचान गर्नु नियामक नियन्त्रण र जोखिम मूल्याङ्कनका लागि महत्त्वपूर्ण छ। यो परीक्षण विषाक्त स्क्रिनिङ र रासायनिक सुरक्षा मूल्याङ्कनमा आधारशिला बनेको छ।

कीवर्ड: N-Nitrosamines, NDSRIs, OECD 471, Enhanced Ames test, Hamster Liver S9, Cytochrome P450 enzymes, Mutation Test