Amesko probaren sarrera
Ames proba, bakterioen alderantzizko mutazio proba bezala ere ezaguna, konposatu kimikoen potentzial mutagenikoa ebaluatzen duen saiakuntza biologikoetarako oso erabilia da, N-nitrosaminak barne. Bruce Ames doktoreak 1970eko hamarkadan garatua, test honek histidinaren sintesian parte hartzen duten geneetan mutazioak daramatzaten Salmonella typhimurium bakterioaren andui espezifikoak erabiltzen ditu. Probak substantzia batek bakterioen DNAn mutazioak eragin ditzakeen ala ez zehazten du, gizakietan kartzinogenizitate potentzialaren zantzua emanez.
Ames Testaren garrantzia N-Nitrosaminetarako
N-Nitrosaminak propietate genotoxiko eta kartzinogenoengatik ezagunak dira, alkilazio eta estres oxidatiboaren bidez DNA kalteak eragin ditzaketelako. Ames proba bereziki erabilgarria da haien efektu mutagenikoak detektatzeko, N-Nitrosamina askok konbertsio entzimatikoaren bidez aktibazio metabolikoa behar baitute DNArekin elkarreragiteko gai diren bitarteko elektrofiliko erreaktiboak sortzeko. Aktibazio hau normalean gibelean gertatzen da P450 zitokromoaren entzimen bidez. Bihurketa metaboliko hori in vitro errepikatzeko, proba aktibazio metabolikoarekin eta gabe egiten da sarritan S9 nahasketa erabiliz, karraskarietatik eratorritako gibeleko entzima prestaketa, ugaztunen metabolismoa imitatzen duena eta jarduera mutagenikoaren detekzioa hobetzen duena.
Ames Probaren metodologia
Ames probaren prozedura estandarrak urrats hauek ditu:
- 1. Test anduiak prestatzea: histidina sintesiaren geneetan aldez aurretik dauden mutazioak dituzten Salmonella typhimurium anduiak erabiltzen dira. Andui hauek ezin dira hazi kanpoko histidina iturririk gabe, alderantzizko mutazio batek funtzioa berreskuratzen ez badu.
- 2. N-Nitrosaminekiko esposizioa: bakterioen kultura probako konposatuarekin (N-Nitrosamina) nahasten da histidina kopuru txiki bat duen agar-plaka minimo batean.
- 3. Aktibazio metabolikoa (S9 nahasketa gehitzea): giza gorputzaren bihurketa metabolikoa kontuan hartzeko, proba lagin batzuek S9 frakzioa dute, arratoi gibeleko mikrosometatik ateratako entzimatiko bat.
- 4. Inkubazioa eta Hazkuntza: plakak 37°C-tan inkubatzen dira 48 orduz, bakterioen koloniak hazten ahal izateko histidinaren sintesia berreskuratzen duten mutazioak gertatzen badira.
- 5. Kolonien zenbaketa eta analisia: kolonia errebertsiboen kopurua (histidina sortzeko gaitasuna berreskuratu zuten bakterioak) zenbatu eta kontrol-plakekin konparatzen da.
- Emaitzen interpretazioa
- Ames proba positiboa: kontrolarekin alderatuta, kolonia erreboltatzaileen hazkunde nabarmenak konposatuak mutazioak eragiten dituela iradokitzen du, propietate mutagenikoak eta potentzialki kartzinogenoak inplikatuz.
- Ames proba negatiboa: igoera nabarmenik ikusten ez bada, litekeena da konposatua ez da mutagenikoa izango probaren baldintzetan.
- Dosi-Erantzun erlazioa: mutazio-tasa handitzen duten dosi altuek mutagenikotasunaren froga indartzen dute.
Ondorioa
Ames proba N-nitrosaminen mutagenizitatea ebaluatzeko metodo azkarra eta kostu-eraginkorra da. Minbiziarekin duten lotura kontuan hartuta, entsegu honen bidez haien propietate mutagenikoak identifikatzea funtsezkoa da arauzko kontrolerako eta arriskuen ebaluaziorako. Proba hau funtsezko oinarria izaten jarraitzen du baheketa toxikologikoan eta segurtasun kimikoaren ebaluazioan.
Gako-hitzak: N-Nitrosaminak, NDSRIak, OECD 471, Ames proba hobetua, Hamster gibela S9, Zitokromo P450 entzimak, Mutazio Testa
Argitalpenaren ordua: 2025-03-11 09:16:10