Ames ፈተና ለኤን-ኒትሮሳሚኖች፡ ተለዋዋጭነትን መገምገም

የአሜስ ፈተና መግቢያ

የ Ames ፈተና፣ እንዲሁም ባክቴሪያል ሪቨርስ ሚውቴሽን ቴስት በመባልም የሚታወቀው ኤን-ኒትሮሳሚንን ጨምሮ የኬሚካል ውህዶችን የ mutagenic እምቅ አቅም የሚገመግም ባዮሎጂካል ጥናት በስፋት ጥቅም ላይ ይውላል። በ1970ዎቹ በዶ/ር ብሩስ አሜስ የተሰራው ይህ ሙከራ በሂስታዲን ውህድ ውስጥ በተሳተፉ ጂኖች ውስጥ ሚውቴሽን የሚይዝ የሳልሞኔላ ታይፊሙሪየም ባክቴሪያ ልዩ ዝርያዎችን ይጠቀማል። ምርመራው አንድ ንጥረ ነገር በባክቴሪያ ዲ ኤን ኤ ውስጥ ሚውቴሽን ሊያመጣ እንደሚችል ይወስናል፣ ይህም በሰዎች ላይ ሊከሰት የሚችለውን የካርሲኖጂኒዝም ምልክት ያሳያል።

የ Ames ፈተና ለ N-Nitrosamines ተገቢነት

N-Nitrosamines በአልካላይዜሽን እና በኦክሳይድ ውጥረት የዲኤንኤ ጉዳት ስለሚያስከትል በጂኖቶክሲክ እና ካርሲኖጂካዊ ባህሪያቸው ይታወቃሉ። የ Ames ፈተና በተለይ የእነርሱን የ mutagenic ተጽእኖ ለመለየት ጠቃሚ ነው፣ ምክንያቱም ብዙ N-Nitrosamines በኤንዛይም ለውጥ አማካኝነት ሜታቦሊዝምን ማግበር ስለሚያስፈልጋቸው ከዲኤንኤ ጋር መስተጋብር መፍጠር የሚችሉ ከፍተኛ ምላሽ ሰጪ ኤሌክትሮፊሊኮች መካከለኛ። ይህ ማግበር በጉበት ውስጥ በሳይቶክሮም P450 ኢንዛይሞች በኩል ይከሰታል። ይህንን የሜታቦሊክ ለውጥ በብልቃጥ ውስጥ ለመድገም ፈተናው ብዙውን ጊዜ የሚካሄደው በሜታቦሊክ ንቃት እና ሳይኖር S9 ድብልቅን በመጠቀም ነው ፣ ከአይጥ የተገኘ የጉበት ኢንዛይም ዝግጅት ፣ ይህም አጥቢ እንስሳትን ሜታቦሊዝምን በመኮረጅ እና የ mutagenic እንቅስቃሴን መለየት ይጨምራል።

የአሜስ ፈተና ዘዴ

የ Ames ፈተና መደበኛ ሂደት የሚከተሉትን ደረጃዎች ያካትታል:

1. 1. የሙከራ ውጥረቶችን ማዘጋጀት፡- የሳልሞኔላ ታይፊሙሪየም ዝርያዎች በሂስታዲን ሲንተሲስ ጂኖች ውስጥ ያሉ ሚውቴሽን ያላቸው የሳልሞኔላ ታይፊሙሪየም ዓይነቶች ጥቅም ላይ ይውላሉ። የተገላቢጦሽ ሚውቴሽን ሥራውን ካልመለሰ በስተቀር እነዚህ ዝርያዎች ያለ ውጫዊ ሂስታዲን ምንጭ ማደግ አይችሉም።
2. 2. ለ N-Nitrosamines መጋለጥ፡- የባክቴሪያ ባህሉ ከሙከራው ውህድ (N-Nitrosamine) ጋር ተቀላቅሎ በትንሹ የአጋር ሳህን ላይ ትንሽ መጠን ያለው ሂስቲዲን ይይዛል።
3. 3. ሜታቦሊክ ማግበር (S9 Mix Addition): በሰው አካል ውስጥ ያለውን የሜታቦሊክ ለውጥን ለመለካት, አንዳንድ የሙከራ ናሙናዎች S9 ክፍልፋይን ያካትታሉ, ከአይጥ ጉበት ማይክሮሶም የተገኘ ኢንዛይም.
4. 4. ኢንኩቤሽን እና እድገት፡- ሳህኖቹ በ 37 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ለ48 ሰአታት እንዲቆዩ ይደረጋል ይህም ሚውቴሽን ከተከሰተ የሂስታዲን ውህደት ወደነበረበት እንዲመለስ የሚያደርግ የባክቴሪያ ቅኝ ግዛቶች እንዲበቅሉ ያስችላቸዋል።
5. 5. የቅኝ ግዛት ቆጠራ እና ትንተና፡- ወደ ኋላ የሚመለሱ ቅኝ ግዛቶች ብዛት (ሂስታዲንን የማምረት አቅም ያዳበሩ ባክቴሪያዎች) ተቆጥረው ከቁጥጥር ሰሌዳዎች ጋር ይነጻጸራሉ።
6. የውጤቶች ትርጓሜ

• አዎንታዊ የአሜስ ሙከራ፡ ከቁጥጥሩ ጋር ሲነጻጸር በከፍተኛ ሁኔታ ወደ ኋላ የሚመለሱ ቅኝ ግዛቶች መጨመር ውህዱ ሚውቴሽን እንደሚያመጣ ይጠቁማል፣ ይህም የሚውቴጅኒክ እና ካርሲኖጂካዊ ባህሪያትን ያሳያል።
• አሉታዊ የአሜስ ፈተና፡ ምንም ጉልህ ጭማሪ ካልታየ፣ ውህዱ በፈተና ሁኔታዎች ስር የማይለወጥ ሊሆን ይችላል።
• ዶዝ-የምላሽ ግንኙነት፡ ከፍተኛ መጠን ያለው የሚውቴሽን መጠን እንዲጨምር ምክንያት የሆነው የ mutagenicity ማስረጃን ያጠናክራል።

መደምደሚያ

የ Ames ፈተና ፈጣን እና ወጪ-ውጤታማ ዘዴ የኤን-Nitrosaminesን ተለዋዋጭነት ለመገምገም ነው። ከካንሰር ጋር ያላቸውን ግንኙነት ግምት ውስጥ በማስገባት፣ በዚህ ጥናት አማካኝነት የሚውቴጅኒክ ባህሪያቸውን መለየት ለቁጥጥር ቁጥጥር እና ለአደጋ ተጋላጭነት ወሳኝ ነው። ይህ ፈተና በመርዛማ ምርምር እና በኬሚካል ደህንነት ግምገማ ውስጥ የማዕዘን ድንጋይ ሆኖ ይቆያል።

ቁልፍ ቃላት፡ N-Nitrosamines፣ NDSRIs፣ OECD 471፣ የተሻሻለ Ames ፈተና፣ የሃምስተር ጉበት S9፣ ሳይቶክሮም P450 ኢንዛይሞች፣ ሚውቴሽን ሙከራ