N-Nitrosamines साठी Ames Test: Mutagenicity मूल्यांकन

एम्स चाचणीचा परिचय

एम्स चाचणी, ज्याला बॅक्टेरियल रिव्हर्स म्युटेशन टेस्ट म्हणूनही ओळखले जाते, ही जैविक तपासणीसाठी मोठ्या प्रमाणावर वापरली जाते जी एन-नायट्रोसामाइन्ससह रासायनिक संयुगेच्या उत्परिवर्ती संभाव्यतेचे मूल्यांकन करते. 1970 च्या दशकात डॉ. ब्रूस एम्स यांनी विकसित केलेली, ही चाचणी साल्मोनेला टायफिमुरियम या जिवाणूच्या विशिष्ट जातींचा वापर करते जे हिस्टिडाइन संश्लेषणात गुंतलेल्या जनुकांमध्ये उत्परिवर्तन करतात. एखाद्या पदार्थामुळे जीवाणूंच्या डीएनएमध्ये उत्परिवर्तन होऊ शकते की नाही हे चाचणी निर्धारित करते, ज्यामुळे मानवांमध्ये संभाव्य कार्सिनोजेनिकतेचे संकेत मिळतात.

N-Nitrosamines साठी Ames चाचणीची प्रासंगिकता

N-Nytrosamines त्यांच्या जीनोटॉक्सिक आणि कार्सिनोजेनिक गुणधर्मांसाठी ओळखले जातात, कारण ते अल्किलेशन आणि ऑक्सिडेटिव्ह तणावाद्वारे डीएनएचे नुकसान करू शकतात. एम्स चाचणी विशेषतः त्यांचे म्युटेजेनिक प्रभाव शोधण्यासाठी उपयुक्त आहे, कारण अनेक N-Nitrosamines ला एंझाइमॅटिक रूपांतरणाद्वारे चयापचय क्रियाशीलता आवश्यक असते ज्यामुळे डीएनएशी संवाद साधण्यास सक्षम उच्च प्रतिक्रियाशील इलेक्ट्रोफिलिक मध्यवर्ती तयार होतात. हे सक्रियकरण सामान्यतः यकृतामध्ये सायटोक्रोम P450 एन्झाइम्सद्वारे होते. विट्रोमध्ये या चयापचय रूपांतरणाची प्रतिकृती तयार करण्यासाठी, चाचणी अनेकदा चयापचय सक्रियतेसह आणि त्याशिवाय S9 मिक्स, उंदीरांपासून तयार केलेली यकृत एन्झाईम तयारी, जी सस्तन प्राण्यांच्या चयापचयची नक्कल करते आणि उत्परिवर्ती क्रियाकलाप शोधण्यात वाढ करते, वापरून केली जाते.

एम्स चाचणीची पद्धत

एम्स चाचणीच्या मानक प्रक्रियेमध्ये खालील चरणांचा समावेश आहे:

1. 1. टेस्ट स्ट्रॅन्सची तयारी: हिस्टिडाइन संश्लेषण जनुकांमध्ये आधीच अस्तित्वात असलेल्या उत्परिवर्तनांसह साल्मोनेला टायफिमुरियम स्ट्रेनचा वापर केला जातो. रिव्हर्स उत्परिवर्तन कार्य पुनर्संचयित केल्याशिवाय हे स्ट्रॅन्स बाह्य हिस्टिडाइन स्त्रोताशिवाय वाढू शकत नाहीत.
2. 2. N-Nitrosamines चे एक्सपोजर: जिवाणू संवर्धन चाचणी संयुगात (N-Nytrosamine) मिसळले जाते ज्यामध्ये हिस्टिडाइनची कमी मात्रा असते.
3. 3. चयापचय सक्रियकरण (S9 मिक्स ॲडिशन): मानवी शरीरातील चयापचय रूपांतरणासाठी, काही चाचणी नमुन्यांमध्ये S9 अंश, उंदराच्या यकृताच्या मायक्रोसोम्समधून एन्झाइमेटिक अर्क समाविष्ट आहे.
4. 4. उष्मायन आणि वाढ: प्लेट्स 37°C तापमानात 48 तास उबवल्या जातात, ज्यामुळे हिस्टिडाइन संश्लेषण पुनर्संचयित करणारे उत्परिवर्तन झाल्यास जिवाणूंच्या वसाहती वाढू शकतात.
5. 5. कॉलनी मोजणी आणि विश्लेषण: रिव्हर्टंट वसाहतींची संख्या (जिवाणू ज्याने हिस्टिडाइन तयार करण्याची क्षमता पुन्हा मिळवली) मोजली जाते आणि नियंत्रण प्लेट्सशी तुलना केली जाते.
6. परिणामांची व्याख्या

• पॉझिटिव्ह एम्स चाचणी: नियंत्रणाच्या तुलनेत रिव्हर्टंट वसाहतींमध्ये लक्षणीय वाढ सूचित करते की कंपाऊंड उत्परिवर्तनांना प्रेरित करते, ज्यामुळे म्युटेजेनिक आणि संभाव्य कार्सिनोजेनिक गुणधर्म सूचित होतात.
• निगेटिव्ह एम्स टेस्ट: जर कोणतीही लक्षणीय वाढ दिसून आली नाही, तर चाचणी परिस्थितीत कंपाऊंड नॉन-म्युटेजेनिक असण्याची शक्यता आहे.
• डोस-प्रतिसाद संबंध: उच्च डोसमुळे उत्परिवर्तन दर वाढतात ज्यामुळे उत्परिवर्तनाचा पुरावा मजबूत होतो.

निष्कर्ष

एन-नायट्रोसामाइन्सच्या उत्परिवर्तनाचे मूल्यांकन करण्यासाठी एम्स चाचणी ही जलद आणि खर्चिक-प्रभावी पद्धत आहे. त्यांचा कर्करोगाशी असलेला संबंध लक्षात घेता, नियामक नियंत्रण आणि जोखीम मूल्यमापनासाठी या तपासणीद्वारे त्यांचे उत्परिवर्ती गुणधर्म ओळखणे महत्त्वाचे आहे. विषारी तपासणी आणि रासायनिक सुरक्षा मूल्यमापनात ही चाचणी एक आधारस्तंभ आहे.

कीवर्ड: N-Nytrosamines, NDSRIs, OECD 471, Enhanced Ames test, Hamster liver S9, Cytochrome P450 enzymes, Mutation Test