តេស្ត Ames សម្រាប់ N-Nitrosamines៖ ការវាយតម្លៃពីភាពប្រែប្រួល

ការណែនាំអំពីការធ្វើតេស្ត Ames

ការធ្វើតេស្ត Ames ដែលត្រូវបានគេស្គាល់ផងដែរថាជា Bacterial Reverse Mutation Test គឺត្រូវបានប្រើប្រាស់យ៉ាងទូលំទូលាយសម្រាប់ការវិភាគជីវសាស្រ្តដែលវាយតម្លៃសក្តានុពលនៃការផ្លាស់ប្តូរនៃសមាសធាតុគីមី រួមទាំង N-Nitrosamines ។ បង្កើតឡើងដោយវេជ្ជបណ្ឌិត Bruce Ames ក្នុងទសវត្សរ៍ឆ្នាំ 1970 ការធ្វើតេស្តនេះប្រើប្រាស់ប្រភេទជាក់លាក់នៃបាក់តេរី Salmonella typhimurium ដែលផ្ទុកការផ្លាស់ប្តូរហ្សែនដែលពាក់ព័ន្ធនឹងការសំយោគអ៊ីស្ទីឌីន។ ការធ្វើតេស្តនេះកំណត់ថាតើសារធាតុមួយអាចបណ្តាលឱ្យមានការផ្លាស់ប្តូរនៅក្នុង DNA បាក់តេរី ដោយផ្តល់នូវការចង្អុលបង្ហាញអំពីសក្តានុពលនៃការបង្កមហារីកនៅក្នុងមនុស្ស។

ភាពពាក់ព័ន្ធនៃការធ្វើតេស្ត Ames សម្រាប់ N-Nitrosamines

N-Nitrosamines ត្រូវបានគេស្គាល់ថាសម្រាប់លក្ខណៈសម្បត្តិ genotoxic និងសារធាតុបង្កមហារីក ព្រោះវាអាចធ្វើឱ្យខូច DNA តាមរយៈ alkylation និង oxidative stress។ ការធ្វើតេស្ត Ames មានប្រយោជន៍ជាពិសេសក្នុងការរកឃើញឥទ្ធិពលនៃការផ្លាស់ប្តូររបស់ពួកគេ ដោយសារ N-Nitrosamines ជាច្រើនត្រូវការសកម្មភាពមេតាបូលីសតាមរយៈការបំប្លែងអង់ស៊ីមដើម្បីបង្កើតជាអន្តរការីអេឡិចត្រូហ្វីលីកដែលមានប្រតិកម្មខ្ពស់ដែលមានសមត្ថភាពធ្វើអន្តរកម្មជាមួយ DNA ។ សកម្មភាពនេះជាធម្មតាកើតឡើងនៅក្នុងថ្លើមតាមរយៈអង់ស៊ីម cytochrome P450។ ដើម្បីចម្លងការបំប្លែងសារជាតិមេតាបូលីសនេះនៅក្នុង vitro ការធ្វើតេស្តនេះត្រូវបានធ្វើឡើងជាញឹកញាប់ដោយមាន និងគ្មានសកម្មភាពមេតាបូលីសដោយប្រើល្បាយ S9 ដែលជាការរៀបចំអង់ស៊ីមថ្លើមដែលបានមកពីសត្វកកេរ ដែលធ្វើត្រាប់តាមមេតាបូលីសថនិកសត្វ និងបង្កើនការរកឃើញនៃសកម្មភាព mutagenic ។

វិធីសាស្រ្តនៃការធ្វើតេស្ត Ames

នីតិវិធីស្តង់ដារនៃការធ្វើតេស្ត Ames ពាក់ព័ន្ធនឹងជំហានដូចខាងក្រោមៈ

1. 1. ការត្រៀមលក្ខណៈតេស្តៈ សំពាធ Salmonella typhimurium ជាមួយនឹងការផ្លាស់ប្តូរដែលមានស្រាប់នៅក្នុងហ្សែនសំយោគ histidine ត្រូវបានប្រើប្រាស់។ ពូជទាំងនេះមិនអាចលូតលាស់ដោយគ្មានប្រភពអ៊ីស្ទីឌីនខាងក្រៅទេ លុះត្រាតែការផ្លាស់ប្តូរបញ្ច្រាសស្តារមុខងារឡើងវិញ។
2. 2. ការប៉ះពាល់នឹង N-Nitrosamines៖ វប្បធម៌បាក់តេរីត្រូវបានលាយបញ្ចូលគ្នាជាមួយនឹងសមាសធាតុតេស្ត (N-Nitrosamine) នៅលើចាន agar តិចតួចដែលមានផ្ទុក histidine តិចតួច។
3. 3. ការធ្វើឱ្យសកម្មមេតាបូលីក (ការបន្ថែម S9 លាយ): ដើម្បីគណនាការបំប្លែងសារជាតិមេតាបូលីសក្នុងរាងកាយមនុស្ស គំរូតេស្តមួយចំនួនរួមមានប្រភាគ S9 ដែលជាសារធាតុចម្រាញ់អង់ស៊ីមពីមីក្រូសូមថ្លើមកណ្តុរ។
4. 4. ការភ្ញាស់ និងការលូតលាស់៖ ចានត្រូវបាន incubation នៅសីតុណ្ហភាព 37°C រយៈពេល 48 ម៉ោង ដែលអនុញ្ញាតឱ្យអាណានិគមរបស់បាក់តេរីលូតលាស់ ប្រសិនបើការផ្លាស់ប្តូរកើតឡើង ដែលស្ដារការសំយោគអ៊ីស្ទីឌីនឡើងវិញ។
5. 5. ការរាប់អាណានិគម និងការវិភាគ៖ ចំនួននៃអាណានិគមដែលត្រលប់មកវិញ (បាក់តេរីដែលទទួលបានលទ្ធភាពផលិតអ៊ីស្ទីឌីនឡើងវិញ) ត្រូវបានរាប់ និងប្រៀបធៀបទៅនឹងចានបញ្ជា។
6. ការបកស្រាយលទ្ធផល

• ការធ្វើតេស្ត Ames វិជ្ជមាន៖ ការកើនឡើងយ៉ាងសំខាន់នៅក្នុងអាណានិគមដែលត្រឡប់មកវិញបើប្រៀបធៀបទៅនឹងវត្ថុបញ្ជាបង្ហាញថាសមាសធាតុនេះបណ្តាលឱ្យមានការផ្លាស់ប្តូរ ដែលបង្ហាញពីលក្ខណៈ mutagenic និងសក្តានុពលបង្កមហារីក។
• ការធ្វើតេស្ត Ames អវិជ្ជមាន៖ ប្រសិនបើមិនមានការកើនឡើងគួរឱ្យកត់សម្គាល់ទេ សមាសធាតុនេះទំនងជាមិនចម្លងតាមលក្ខខណ្ឌនៃការធ្វើតេស្ត។
• កម្រិតថ្នាំ-ទំនាក់ទំនងឆ្លើយតប៖ កំរិតខ្ពស់ដែលនាំទៅរកការកើនឡើងអត្រានៃការផ្លាស់ប្តូរ ពង្រឹងភស្តុតាងនៃការផ្លាស់ប្តូរហ្សែន។

សេចក្តីសន្និដ្ឋាន

ការធ្វើតេស្ត Ames គឺជាវិធីសាស្ត្រដ៏លឿន និងចំណាយ-មានប្រសិទ្ធភាពក្នុងការវាយតម្លៃពីភាពប្រែប្រួលនៃ N-Nitrosamines។ ដោយសារការផ្សារភ្ជាប់របស់ពួកគេជាមួយនឹងជំងឺមហារីក ការកំណត់អត្តសញ្ញាណលក្ខណៈនៃការផ្លាស់ប្តូររបស់ពួកគេតាមរយៈការវិភាគនេះគឺមានសារៈសំខាន់សម្រាប់ការគ្រប់គ្រងបទប្បញ្ញត្តិ និងការវាយតម្លៃហានិភ័យ។ ការធ្វើតេស្តនេះនៅតែជាមូលដ្ឋានគ្រឹះក្នុងការត្រួតពិនិត្យជាតិពុល និងការវាយតម្លៃសុវត្ថិភាពគីមី។

ពាក្យគន្លឹះ៖ N-Nitrosamines, NDSRIs, OECD 471, Enhanced Ames test, Hamster liver S9, Cytochrome P450 enzymes, Mutation Test