N-Nitrosamines-ийн Амес тест: Мутаген чанарыг үнэлэх

Ames тестийн танилцуулга

Бактерийн урвуу мутацийн тест гэгддэг Амес тест нь N-Nitrosamines зэрэг химийн нэгдлүүдийн мутагений чадавхийг үнэлдэг биологийн шинжилгээнд өргөн хэрэглэгддэг. Доктор Брюс Амес 1970-аад онд боловсруулсан энэхүү туршилтыг гистидиний нийлэгжилтэнд оролцдог генийн мутаци агуулсан Salmonella typhimurium нянгийн тусгай омгийг ашигладаг. Уг шинжилгээ нь тухайн бодис нь бактерийн ДНХ-д мутаци үүсгэж болох эсэхийг тодорхойлдог бөгөөд энэ нь хүний ​​хорт хавдар үүсгэх шинж тэмдэг болдог.

N-Nitrosamines-д зориулсан Ames тестийн хамаарал

N-Nitrosamines нь генотоксик болон хорт хавдар үүсгэгч шинж чанараараа алдартай бөгөөд тэдгээр нь алкилизаци болон исэлдэлтийн стрессээр дамжуулан ДНХ-ийн эвдрэлийг өдөөж чаддаг. Амес тест нь тэдний мутаген нөлөөг илрүүлэхэд онцгой ач холбогдолтой, учир нь олон тооны N-Nitrosamines нь ДНХ-тэй харилцан үйлчлэлцэх чадвартай, өндөр реактив электрофил завсрын бодис үүсгэхийн тулд ферментийн хувиргалтаар бодисын солилцоог идэвхжүүлэх шаардлагатай болдог. Энэ идэвхжүүлэлт нь ихэвчлэн цитохром P450 ферментээр дамжин элгэнд тохиолддог. Энэхүү бодисын солилцооны хувиргалтыг in vitro-д хуулбарлахын тулд сорилыг ихэвчлэн мэрэгч амьтдаас гаргаж авсан элэгний ферментийн бэлдмэл болох S9 хольцыг ашиглан бодисын солилцооны идэвхжилтэй болон идэвхжилгүйгээр хийдэг бөгөөд энэ нь хөхтөн амьтдын бодисын солилцоог дуурайж, мутагений идэвхийг илрүүлэх чадварыг сайжруулдаг.

Амес тестийн арга зүй

Амес тестийн стандарт журам нь дараах алхмуудыг агуулна.

1. 1. Туршилтын омог бэлтгэх: Гистидиний нийлэгжилтийн генийн өмнөх мутацитай Salmonella typhimurium омгийг ашигладаг. Урвуу мутаци нь үйл ажиллагааг сэргээхгүй бол эдгээр омгууд нь гадны гистидиний эх үүсвэргүйгээр ургаж чадахгүй.
2. 2. N-Nitrosamines-д өртөх: Бактерийн өсгөвөрийг бага хэмжээний гистидин агуулсан хамгийн бага агар хавтан дээр туршилтын нэгдэл (N-Nitrosamine)-тай хольсон.
3. 3. Бодисын солилцоог идэвхжүүлэх (S9 холимог нэмэлт): Хүний бие дэх бодисын солилцооны өөрчлөлтийг тооцохын тулд зарим туршилтын дээжинд хархны элэгний микросомоос ферментийн ханд болох S9 фракцыг оруулсан болно.
4. 4. Өсгөвөрлөлт ба өсөлт: ялтсуудыг 37°С-т 48 цагийн турш өсгөвөрлөж, гистидиний нийлэгжилтийг сэргээх мутаци үүсвэл бактерийн колони ургах боломжийг олгоно.
5. 5. Колони тоолох, дүн шинжилгээ хийх: Буцаж буй колонийн тоог (гистидин үүсгэх чадварыг сэргээсэн бактери) тоолж, хяналтын ялтсуудтай харьцуулна.
6. Үр дүнгийн тайлбар

• Эерэг Амес тест: Хяналттай харьцуулахад буцах колонийн тоо мэдэгдэхүйц нэмэгдэж байгаа нь нэгдэл нь мутаген болон хорт хавдар үүсгэх шинж чанарыг илтгэдэг мутаци үүсгэдэг болохыг харуулж байна.
• Сөрөг Амес тест: Хэрэв мэдэгдэхүйц өсөлт ажиглагдаагүй бол туршилтын нөхцөлд нэгдэл мутагеник биш байх магадлалтай.
• Тун-Хариултын хамаарал: Мутацийн түвшин нэмэгдэхэд хүргэдэг өндөр тун нь мутагенийн нотолгоог бэхжүүлдэг.

Дүгнэлт

Ames тест нь N-Nitrosamines-ийн мутаген чанарыг үнэлэх хурдан бөгөөд зардал багатай арга юм. Хорт хавдартай холбоотой байдаг тул энэ шинжилгээгээр мутаген шинж чанарыг нь тодорхойлох нь зохицуулалтын хяналт, эрсдлийн үнэлгээнд маш чухал юм. Энэхүү туршилт нь хор судлалын шинжилгээ, химийн аюулгүй байдлын үнэлгээний тулгын чулуу хэвээр байна.

Түлхүүр үг: N-Nitrosamines, NDSRIs, OECD 471, Enhanced Ames тест, Шишүүхэй элэг S9, Cytochrome P450 фермент, Мутацийн тест