Nitrosamines üçün Ames testi: Mutageniciliyin qiymətləndirilməsi

Ames testinə giriş

Ames testi, bakterial tərs mutasiya testi kimi də tanınan, kimyəvi birləşmələrin mutagen potensialını, o cümlədən nitrosamines-in potensialını qiymətləndirən bioloji assay üçün geniş istifadə olunur. Dr. Bruce Ames tərəfindən hazırlanan 1970-ci illərdə bu test histidin sintezində iştirak edən genlərdə mutasiyalar daşıyan bakteriya Salmonella Tyfimuriumun xüsusi suşlarını istifadə edir. Test, bir maddənin bakterial DNT-də mutasiyalara səbəb ola biləcəyini, insanlarda potensial kanserogen baxımının göstəricisini təmin etdiyini təyin edir.

Nitrosamines üçün Ames Testinin aktuallığı

N - nitrosamines, genotoksik və kanserogen xüsusiyyətləri ilə tanınır, çünki onlar alkilasiya və oksidləşdirici stress vasitəsilə DNT zərərlərini təmin edə bilərlər. Ames testi, mutagenik effektlərini aşkar etmək üçün xüsusilə faydalıdır, çünki bir çoxu nitrosaminlər DNT ilə qarşılıqlı əlaqə qurmağa qadir olan yüksək reaktiv elektrofiliklər meydana gətirmək üçün enzymatik dönüşümlə metabolik aktivləşdirmə tələb edir. Bu aktivasiya adətən sitochrome p450 fermentləri vasitəsilə qaraciyərdə baş verir. Vitroda bu metabolik dönüşümü təkrarlamaq üçün test, mamiliya metabolizmasını təqlid edən və mutagen fəaliyyətinin aşkarlanmasını təmin edən gəmiricilərdən yaranan qaraciyər fermentinin hazırlanması ilə birlikdə və S9 Mix-dən istifadə edərək metabolik aktivləşdirmə ilə aparılır.

Ames testinin metodologiyası

Ames testinin standart proseduru aşağıdakı addımları əhatə edir:

1. 1. Test suşlarının hazırlanması: SALMONELLA Tifimurium suşları, histidin sintez genlərində mövcud mutasiyalardan ibarət olan tifimurium suşları istifadə olunur. Tərs mutasiya funksiyası funksiyası olmadıqda bu suşlar xarici histidin mənbəyi olmadan böyüyə bilməz.
2. 2. Nitrosamines-ə məruz qalma: Bakterial mədəniyyət, az miqdarda histidin olan minimal bir agar boşqabda test birləşməsi (n) nitrosamin) ilə qarışdırılır.
3. 3. Metabolik Aktivləşdirmə (S9 Mix Əlavə): İnsan orqanizmində metabolik dönüşüm üçün nəzərdə tutulmuş bəzi test nümunələri S9 fraksiya, siçovul qaraciyər mikrosomalarından enzimatik ekstraktı daxildir.
4. 4. İnkubasiya və böyümə: plitələr 48 saat ərzində 37 ° C-də inkubasiya olunur, mutiyaların histidin sintezini bərpa edən mutasiyalar baş verərsə, bakterial koloniyaların böyüməsinə imkan verir.
5. .
6. Nəticələrin təfsiri

• Müsbət AMES testi: İdarəetmə ilə müqayisədə əksol koloniyaların əhəmiyyətli bir artması, mürəkkəbliyi mutasiyalara, mutagen və potensial kanserogen xüsusiyyətlərini ifadə edir.
• Mənfi Ames Testi: Heç bir əhəmiyyətli bir artım müşahidə olunmasa, birləşmə, ehtimal ki, test şərtləri altında deyil.
• DOSE - Cavab münasibətləri: Artan mutasiya nisbətlərinin artmasına səbəb olan daha yüksək dozalar mutageniciliyin dəlillərini gücləndirir.

Rəy

Ames testi sürətli və qiymətdir Bu ASSAY vasitəsilə mutagen xüsusiyyətlərini müəyyənləşdirən xərçənglə birlikdə məlumat verərək tənzimləmə nəzarəti və risklərin qiymətləndirilməsi üçün çox vacibdir. Bu test toksikoloji seçim və kimyəvi təhlükəsizlik qiymətləndirməsində bir təməl daşı olaraq qalır.

Açar sözlər: n - nitrosaminlər, ndroses, oecd 471, inkişaf etmiş Ames testi, Hamster Liver S9, Sitochrome P450 fermentləri, mutasiya testi