Уводзіны ў тэст Эймса
Тэст AMES, таксама вядомы як тэст на зваротную мутацыю бактэрый, шырока выкарыстоўваецца для біялагічнага аналізу, які ацэньвае мутагенны патэнцыял хімічных злучэнняў, у тым ліку n - нітразаміны. Гэты тэст, распрацаваны доктарам Брусам Эймсам у 1970 -х гадах, выкарыстоўвае пэўныя штамы бактэрый сальманелы тыфімурыя, які нясе мутацыі ў генах, якія ўдзельнічаюць у сінтэзе гістыдыну. Тэст вызначае, ці можа рэчыва выклікаць мутацыі ў бактэрыяльнай ДНК, што сведчыць аб патэнцыяльнай канцерогеннасці ў чалавека.
Актуальнасць тэсту Ames для n - нітразаміны
N - нітразаміны вядомыя сваімі генотоксическими і канцерогенным уласцівасцям, паколькі яны могуць выклікаць пашкоджанне ДНК праз алкилирование і акісляльны стрэс. Тэст AMES асабліва карысны пры выяўленні іх мутагенных эфектаў, бо многія n - нітразаміны патрабуюць метабалічнай актывацыі з дапамогай ферментатыўнага пераўтварэння для фарміравання высока рэактыўных электрафільных прамежкавых прадуктаў, здольных узаемадзейнічаць з ДНК. Гэтая актывацыя звычайна адбываецца ў печані праз ферменты цытахрому Р450. Каб паўтарыць гэта метабалічнае пераўтварэнне in vitro, тэст часта праводзіцца з і без метабалічнай актывацыі з выкарыстаннем сумесі S9, падрыхтоўку печані, атрыманыя з грызуноў, якія імітуюць метабалізм млекакормячых і ўзмацняе выяўленне мутагеннай актыўнасці.
Метадалогія тэсту Ames
Стандартная працэдура тэсту AMES ўключае ў сябе наступныя дзеянні:
- 1. Падрыхтоўка тэставых штамаў: выкарыстоўваюцца штамы сальманелы тыфімурыя з папярэднімі мутацыямі ў генах сінтэзу гістыдыну. Гэтыя штамы не могуць расці без знешняй крыніцы гістыдыну, калі зваротная мутацыя не аднаўляе функцыю.
- 2. Уздзеянне n - нітразаміны: бактэрыяльная культура змешваецца з выпрабавальным злучэннем (N - нітразамін) на мінімальнай агарнай пласціне, якая змяшчае невялікую колькасць гістыдыну.
- 3. Метабалічная актывацыя (дадатак да сумесі S9): для ўліку метабалічнага пераўтварэння ў чалавечым целе, некаторыя выпрабавальныя ўзоры ўключаюць фракцыю S9, ферментатыўны экстракт з мікрасомы печані пацукоў.
- 4. Інкубацыя і рост: пласціны вытрымліваюць пры 37 ° С на працягу 48 гадзін, што дазваляе росту бактэрыяльных калоній, калі ўзнікаюць мутацыі, якія аднаўляюць сінтэз гістыдыну.
- 5. Падлік калоніі і аналіз: Колькасць рэвертавых калоній (бактэрыі, якія аднаўлялі здольнасць вырабляць гістыдын), падлічваецца і параўноўваецца з кантрольнымі пласцінамі.
- Інтэрпрэтацыя вынікаў
- Станоўчы тэст AMES: значнае павелічэнне рэверсальных калоній у параўнанні з кантролем дазваляе выказаць здагадку, што злучэнне выклікае мутацыі, што азначае мутагенныя і патэнцыйна канцерогенныя ўласцівасці.
- Адмоўны тэст AMES: Калі значнага павелічэння не назіраецца, злучэнне, верагодна, не - мутагенны ў тэставых умовах.
- Доза - Адказ узаемасувязі: больш высокія дозы, якія прыводзяць да павелічэння хуткасці мутацыі, умацоўваюць доказы мутагеннасці.
Выснова
Тэст AMES - гэта хуткі і кошт - эфектыўны метад ацэнкі мутагеннасці n - нітразамінаў. Улічваючы сувязь з ракам, выяўленне іх мутагенных уласцівасцей праз гэты аналіз мае вырашальнае значэнне для рэгулявання і ацэнкі рызыкі. Гэты тэст застаецца краевугольным каменем у таксікалагічнай скрынінгу і ацэнцы хімічнай бяспекі.
Ключавыя словы: N - Нітразаміны, NDSRIS, OECD 471, Удасканалены тэст Эйма, хамяк печань S9, ферменты цытахрому Р450, мутацыйны тэст
Час паведамлення: 2025 - 03 - 11 09:16:10