Ames test za n - nitrozamine: procjena mutagenosti

Uvod u test Ames

Test Ames-a, poznat i kao bakterijski test za obrnute mutacije široko se koristi za biološku test koji procjenjuje mutagenski potencijal hemijskih spojeva, uključujući n - nitrozamine. Razvio dr. Bruce Ames 1970-ih, ovaj test koristi specifične sojeve bakterije Salmonella tifurijum koji nose mutacije u genima koji su uključeni u sintezu histidin. Test određuje da li tvar može prouzrokovati mutacije u bakterijskom DNK, pružajući naznaku potencijalne karcinogenosti kod ljudi.

Relevantnost ames testa za n - nitrozamine

N - Nitrozamini su poznati po svojim genotoksičnim i karcinogenim svojstvima, jer mogu izazvati oštećenja DNK putem alkilacije i oksidativnog stresa. Test Ames-a posebno je koristan u otkrivanju njihovih mutagenskih efekata, što mnogi n - nitrozamini zahtijevaju metaboličku aktivaciju putem enzimskog pretvorbe za formiranje visoko reaktivnih elektrofilnih intermedijara koji mogu interakciju sa DNK-om. Ova aktivacija obično se događa u jetri kroz enzime citohrom P450. Da biste replicirali ovu metaboličku pretvorbu in vitro, test se često vrši sa i bez metaboličke aktivacije pomoću S9 mješavine, priprema enzima jetre dobivena iz glodara, koji oponašaju metabolizam sisara i poboljšava otkrivanje mutagenske aktivnosti.

Metodologija testa amesa

Standardni postupak testa AMES uključuje sljedeće korake:

1. 1. Priprema ispitnih sojeva: koriste se sojevi tiffimurija salmonele s pre - postojećim mutacijama u genima sinteze histidin. Ovi sojevi ne mogu rasti bez vanjskog izvora histidina, osim ako reverzna mutacija vraća funkcija.
2. 2. Izloženost N - nitrozaminima: Bakterijska kultura se miješa sa testnim spojem (n - nitrosaminom) na minimalnoj ploči agar koji sadrži malu količinu histidina.
3. 3. Metabolička aktivacija (dodatak S9 Mješalica): Da bi se razmatrala metabolička pretvorba u ljudskom tijelu, neki testni uzorci uključuju frakciju S9, enzimski ekstrakt od mikrosoma o jetru pacova.
4. 4 Inkubacija i rast: ploče se inkubiraju na 37 ° C 48 sati, omogućavajući bakterijskim kolonijama da raste ako se pojave mutacije koje vraćaju sintezu histidin.
5. 5. Broj i analiza kolonije: Broj revertnih kolonija (bakterije koje su povratile sposobnost stvaranja histidina) računa se i u odnosu na kontrolne ploče.
6. Tumačenje rezultata

• Pozitivni ames test: Značajno povećanje revertnih kolonija u odnosu na kontrolu sugerira da spoj izaziva mutacije, podrazumijeva mutagena i potencijalno kancerogena svojstva.
• Negativni ames test: Ako se ne primijeti značajan porast, spoj je vjerovatno ne - mutagenic u testnim uvjetima.
• Doza - Odnos odgovora: veće doze koje vode do povećanih stopa mutacije jačaju dokaze mutagenosti.

Zaključak

Ames test je brz i trošak - efikasna metoda za procjenu mutagenosti N - nitrozamina. S obzirom na njihovu povezanost sa rakom, identificirajući njihovu mutagena svojstva kroz ovaj test ključna je za regulatornu kontrolu i procjenu rizika. Ovaj test ostaje kamen temeljac u toksikološkom projekciji i evaluaciji hemijskog sigurnosti.

Ključne riječi: n - nitrozamini, NDSris, OECD 471, poboljšani ames test, hrčka jetra S9, enzimi citohrom P450, mutacijski test