Prova Ames per a N - nitrosamines: avaluació de la mutagenicitat

Introducció a la prova Ames

El test AMES, també conegut com a test de mutació inversa bacteriana és una àmplia utilitzada per a un assaig biològic que avalua el potencial mutagènic dels compostos químics, incloses les nitrosamines N - Desenvolupat pel doctor Bruce Ames a la dècada de 1970, aquesta prova utilitza soques específiques del bacteri Salmonella tifimurium que transporten mutacions en gens implicats en la síntesi d’histidina. La prova determina si una substància pot causar mutacions en l'ADN bacterià, proporcionant una indicació de potencial carcinogenicitat en humans.

Rellevància de la prova Ames per a n - nitrosamines

N - nitrosamines són conegudes per les seves propietats genotòxiques i cancerígenes, ja que poden induir danys en l'ADN mitjançant l'alquilació i l'estrès oxidatiu. El test AMES és particularment útil per detectar els seus efectes mutagènics, ja que moltes nitrosamines requereixen una activació metabòlica mitjançant una conversió enzimàtica per formar intermedis electròfils altament reactius capaços de relacionar -se amb l'ADN. Aquesta activació es produeix normalment al fetge mitjançant enzims citocroms P450. Per replicar aquesta conversió metabòlica in vitro, la prova es realitza sovint amb i sense activació metabòlica mitjançant la barreja S9, una preparació enzimàtica hepàtica derivada de rosegadors, que imita el metabolisme dels mamífers i millora la detecció de l’activitat mutagènica.

Metodologia de la prova Ames

El procediment estàndard de la prova AMES implica els passos següents:

1. 1. Preparació de soques de prova: s’utilitzen soques de Salmonella typhimurium amb mutacions pre -existents en gens de síntesi d’histidina. Aquestes soques no poden créixer sense una font d’histidina externa tret que una mutació inversa restableixi la funció.
2. 2. Exposició a N - nitrosamines: el cultiu bacterià es barreja amb el compost de prova (N - nitrosamina) en una placa d’agar mínima que conté una petita quantitat d’histidina.
3. 3. Activació metabòlica (addició de barreja S9): Per tenir en compte la conversió metabòlica en el cos humà, algunes mostres de prova inclouen la fracció S9, un extracte enzimàtic dels microsomes del fetge de rata.
4. 4. Incubació i creixement: Les plaques s’incuben a 37 ° C durant 48 hores, permetent que les colònies bacterianes creixin si es produeixen mutacions que restableixen la síntesi d’histidina.
5. 5. Recompte i anàlisi de colònies: es compta el nombre de colònies revertòries (bacteris que van recuperar la capacitat de produir histidina) i es compara amb les plaques de control.
6. Interpretació dels resultats

• Test positiu AMES: Un augment significatiu de les colònies revertants en comparació amb el control suggereix que el compost indueix mutacions, implicant propietats mutagèniques i potencialment cancerígenes.
• Prova de les AME negatives: si no s’observa cap augment significatiu, el compost és probablement no mutagènic en les condicions de prova.
• Dosi - Relació de resposta: dosis més altes que condueixen a un augment de les taxes de mutació reforça l’evidència de mutagenicitat.

Conclusió

La prova AMES és un mètode ràpid i eficaç per avaluar la mutagenicitat de les nitrosamines n - Tenint en compte la seva associació amb el càncer, identificar les seves propietats mutagèniques a través d’aquest assaig és crucial per al control regulatori i l’avaluació del risc. Aquesta prova continua sent una pedra angular en el cribratge toxicològic i l'avaluació de la seguretat química.

Paraules clau: N - Nitrosamines, NDSRIS, OCDE 471, Test AMES millorat, Hamster Liver S9, Enzims Citocrom P450, Test de mutació