Ames -test for n - nitrosaminer: vurdering af mutagenicitet

Introduktion til Ames -testen

AMES -testen, også kendt som bakteriel omvendt mutationstest, er en meget anvendt til biologisk assay, der evaluerer det mutagene potentiale af kemiske forbindelser, herunder N - nitrosaminer. Denne test er udviklet af Dr. Bruce Ames i 1970'erne og anvender specifikke stammer af bakterien Salmonella typhimurium, der bærer mutationer i gener involveret i histidinsyntese. Testen bestemmer, om et stof kan forårsage mutationer i bakterielt DNA, hvilket giver en indikation af potentiel kræftfremkaldende virkning hos mennesker.

Relevans af Ames -testen for n - nitrosaminer

N - nitrosaminer er kendt for deres genotoksiske og kræftfremkaldende egenskaber, da de kan inducere DNA -skade gennem alkylering og oxidativ stress. AMES -testen er især nyttig til at detektere deres mutageniske virkninger, da mange N Denne aktivering forekommer typisk i leveren gennem cytochrome P450 -enzymer. For at gentage denne metaboliske omdannelse in vitro udføres testen ofte med og uden metabolisk aktivering ved hjælp af S9 -blanding, et leverenzympræparat afledt af gnavere, der efterligner pattedyrsmetabolisme og forbedrer påvisning af mutagen aktivitet.

Metodologi for Ames -testen

Standardproceduren for AMES -testen involverer følgende trin:

1. 1. Fremstilling af teststammer: Salmonella Typhimurium -stammer med pre - eksisterende mutationer i histidinsyntesegener anvendes. Disse stammer kan ikke vokse uden en ekstern histidinkilde, medmindre en omvendt mutation gendanner funktion.
2. 2. Eksponering for n - nitrosaminer: Bakteriekulturen blandes med testforbindelsen (n - nitrosamin) på en minimal agarplade indeholdende en lille mængde histidin.
3. 3. Metabolisk aktivering (S9 -blandetilsætning): For at redegøre for metabolisk omdannelse i den menneskelige krop inkluderer nogle testprøver S9 -fraktion, en enzymatisk ekstrakt fra rottelevermikrosomer.
4. 4. Inkubation og vækst: Pladerne inkuberes ved 37 ° C i 48 timer, hvilket gør det muligt for bakteriekolonier at vokse, hvis mutationer forekommer, der gendanner histidinsyntese.
5. 5. Kolonioptælling og -analyse: Antallet af reververtantkolonier (bakterier, der genvinder evnen til at producere histidin) tælles og sammenlignes med kontrolplader.
6. Fortolkning af resultater

• Positive Ames -test: En signifikant stigning i revertantkolonier sammenlignet med kontrollen antyder forbindelsen inducerer mutationer, hvilket indebærer mutagene og potentielt kræftfremkaldende egenskaber.
• Negativ ames -test: Hvis der ikke observeres nogen signifikant stigning, er forbindelsen sandsynligvis ikke - mutagen under testbetingelserne.
• Dosis - Responsforhold: Højere doser, der fører til øgede mutationshastigheder, styrker beviset for mutagenicitet.

Konklusion

AMES -testen er en hurtig og omkostning - effektiv metode til vurdering af mutageniciteten af ​​N - nitrosaminer. I betragtning af deres tilknytning til kræft er det afgørende for lovgivningsmæssig kontrol og risikovurdering at identificere deres mutagene egenskaber gennem dette assay. Denne test forbliver en hjørnesten i toksikologisk screening og evaluering af kemisk sikkerhed.

Nøgleord: N - nitrosaminer, NDSRI'er, OECD 471, Forbedret Ames -test, hamster lever S9, cytochrome P450 enzymer, mutationstest