Amesi test n - nitrosamiinide jaoks: mutageensuse hindamine

Sissejuhatus Amesi testi

AMES -i test, mida tuntakse ka kui bakteriaalset pöördmutatsiooni test, on laialdaselt kasutatav bioloogiliseks testimiseks, mis hindab keemiliste ühendite, sealhulgas N - nitrosamiinide mutageenset potentsiaali. Dr Bruce Amesi poolt 1970. aastatel välja töötatud test kasutab bakteri salmonella typiimuriumi spetsiifilisi tüvesid, mis kannavad mutatsioone histidiini sünteesis osalevates geenides. Test määrab, kas aine võib põhjustada bakteriaalse DNA mutatsioone, pakkudes võimaliku kantserogeensuse näidustust inimestel.

Amesi testi asjakohasus n - nitrosamiinide jaoks

N - nitrosamiinid on tuntud oma genotoksiliste ja kantserogeensete omaduste poolest, kuna need võivad indutseerida DNA kahjustusi alküülimise ja oksüdatiivse stressi kaudu. AMES -i test on eriti kasulik nende mutageense toime tuvastamisel, kuna paljud N - nitrosamiinid vajavad metaboolset aktiveerimist ensümaatilise muundamise kaudu, moodustades väga reaktiivsed elektrofiilsed vaheühendid, mis on võimelised DNA -ga interakteerumiseks. See aktiveerimine toimub tavaliselt maksas tsütokroom P450 ensüümide kaudu. Selle metaboolse muundamise in vitro reprodutseerimiseks viiakse test sageli läbi metaboolse aktiveerimise ja ilma, kasutades närilistest saadud maksaensüümide preparaati S9 segu, mis jäljendab imetajate metabolismi ja suurendab mutageense aktiivsuse tuvastamist.

AMES -testi metoodika

AMES -testi standardprotseduur hõlmab järgmisi samme:

1. 1. Testitüvede ettevalmistamine: Salmonella Typhimurium tüved, millel on Pre - olemasolevad mutatsioonid histidiini sünteesi geenides. Need tüved ei saa kasvada ilma välise histidiiniallikata, kui vastupidine mutatsioon ei taasta funktsiooni.
2. 2. kokkupuude n - nitrosamiinidega: bakterikultuur segatakse testühendiga (N - nitrosamiin) minimaalsel agariplaadil, mis sisaldab väikeses koguses histidiini.
3. 3. Metaboolne aktiveerimine (S9 segu lisamine): inimkehas metaboolse muundamise arvestamiseks hõlmavad mõned testproovid S9 fraktsiooni, ensümaatilist ekstrakti roti maksa mikrosoomidest.
4. 4. inkubeerimine ja kasv: plaate inkubeeritakse temperatuuril 37 ° C 48 tundi, võimaldades bakterikolooniatel kasvada, kui tekivad mutatsioonid, mis taastavad histidiini sünteesi.
5. 5. Kolooniate loendamine ja analüüs: loendatakse revertantsete kolooniate (bakterid, mis taastasid histidiini tootmise võimet) ja võrreldakse kontrollplaatidega.
6. Tulemuste tõlgendamine

• Positiivne AMES -test: revertantsete kolooniate märkimisväärne suurenemine võrreldes kontrolliga viitab sellele, et ühend indutseerib mutatsioone, mis viitab mutageensele ja potentsiaalselt kantserogeensetele omadustele.
• Negatiivne AMES -test: kui olulist suurenemist ei täheldata, on ühend testitingimustes tõenäoliselt mitte - mutageenne.
• Annus - Reaktsiooni suhe: suuremad annused, mis põhjustavad mutatsioonide suurenemist, tugevdavad mutageensuse tõendeid.

Järeldus

AMES -test on kiire ja kulu - efektiivne meetod N - nitrosamiinide mutageensuse hindamiseks. Arvestades nende seost vähiga, on regulatiivse kontrolli ja riskihindamiseks ülioluline nende mutageensete omaduste tuvastamine selle testi kaudu. See test on toksikoloogilises sõeluuringu ja keemilise ohutuse hindamisel nurgakivi.

Märksõnad: n - nitrosamiinid, NDSRIS, OECD 471, täiustatud AMES -test, hamstri maks S9, tsütokroom P450 ensüümid, mutatsioonitest