Test d'Ames pour N - Nitrosamines: Évaluation de la mutagénicité

Introduction au test Ames

Le test Ames, également connu sous le nom de test de mutation inverse bactérienne, est un test biologique largement utilisé qui évalue le potentiel mutagène des composés chimiques, y compris les n - nitrosamines. Développé par le Dr Bruce Ames dans les années 1970, ce test utilise des souches spécifiques de la bactérie Salmonella typhimurium qui porte des mutations dans les gènes impliqués dans la synthèse de l'histidine. Le test détermine si une substance peut provoquer des mutations de l'ADN bactérien, fournissant une indication de cancérogénicité potentielle chez l'homme.

Pertinence du test Ames pour n - nitrosamines

N - nitrosamines sont connues pour leurs propriétés génotoxiques et cancérigènes, car elles peuvent induire des dommages à l'ADN par alkylation et stress oxydatif. Le test Ames est particulièrement utile pour détecter leurs effets mutagènes, car de nombreuses n - nitrosamines nécessitent une activation métabolique via une conversion enzymatique pour former des intermédiaires électrophiles hautement réactifs capables d'interagir avec l'ADN. Cette activation se produit généralement dans le foie à travers les enzymes du cytochrome P450. Pour reproduire cette conversion métabolique in vitro, le test est souvent effectué avec et sans activation métabolique en utilisant le mélange S9, une préparation enzymatique hépatique dérivée de rongeurs, qui imite le métabolisme des mammifères et améliore la détection de l'activité mutagénique.

Méthodologie du test Ames

La procédure standard du test Ames implique les étapes suivantes:

1. 1. Préparation des souches d'essai: les souches de Salmonella typhimurium avec des mutations existantes dans les gènes de synthèse d'histidine sont utilisées. Ces souches ne peuvent pas croître sans une source d'histidine externe à moins qu'une mutation inverse ne restaure la fonction.
2. 2. Exposition aux n - nitrosamines: la culture bactérienne est mélangée avec le composé d'essai (n - nitrosamine) sur une plaque de gélose minimale contenant une petite quantité d'histidine.
3. 3. Activation métabolique (ajout de mélange S9): Pour tenir compte de la conversion métabolique dans le corps humain, certains échantillons de test incluent la fraction S9, un extrait enzymatique des microsomes hépatiques de rat.
4. 4. Incubation et croissance: les plaques sont incubées à 37 ° C pendant 48 heures, permettant aux colonies bactériennes de se développer si des mutations se produisent qui restaurent la synthèse de l'histidine.
5. 5. Comptage et analyse des colonies: Le nombre de colonies réverstiques (bactéries qui ont retrouvé la capacité de produire de l'histidine) est comptée et comparée aux plaques témoins.
6. Interprétation des résultats

• Test positif d'Ames: une augmentation significative des colonies révertissantes par rapport au témoin suggère que le composé induit des mutations, impliquant des propriétés mutagènes et potentiellement cancérigènes.
• Test négatif d'Ames: si aucune augmentation significative n'est observée, le composé est probablement non - mutagène dans les conditions de test.
• Dose - Relation de réponse: des doses plus élevées conduisant à une augmentation des taux de mutation renforcent les preuves de mutagénicité.

Conclusion

Le test Ames est une méthode rapide et efficace pour évaluer la mutagénicité des n - nitrosamines. Compte tenu de leur association avec le cancer, l'identification de leurs propriétés mutagènes grâce à ce test est crucial pour le contrôle réglementaire et l'évaluation des risques. Ce test reste une pierre angulaire du dépistage toxicologique et de l'évaluation de la sécurité chimique.

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