Ames tès pou n - nitrosamin: evalye mutagenicity

Entwodiksyon nan tès la Ames

Tès AMES la, ke yo rele tou tès mitasyon bakteri se yon lajman ki itilize pou tès byolojik ki evalye potansyèl mutagèn nan konpoze chimik, ki gen ladan N - nitrosamin. Devlope pa Dr Bruce Ames nan lane 1970 yo, tès sa a itilize tansyon espesifik nan bakteri Salmonèl typhimurium a ki pote mitasyon nan jèn ki enplike nan sentèz histidine. Tès la detèmine si yon sibstans ki sou ka lakòz mitasyon nan ADN bakteri, bay yon endikasyon de potansyèl kanserojèn nan imen.

Enpòtans nan tès la Ames pou n - nitrosamin

N - nitrosamin yo konnen pou pwopriyete jenotoksik ak kanserojèn yo, menm jan yo ka pwovoke domaj ADN nan alkilasyon ak estrès oksidatif. Tès la Ames se patikilyèman itil nan detekte efè mutagèn yo, kòm anpil n - nitrosamin mande pou metabolik aktivasyon atravè konvèsyon anzimatik yo fòme trè reyaktif entèmedyè elèktrofil ki kapab kominike avèk ADN. Aktivasyon sa a tipikman rive nan fwa a nan sitokrom P450 anzim yo. Pou replike konvèsyon sa a metabolik nan vitro, se tès la souvan fèt ak ak san aktivasyon metabolik lè l sèvi avèk S9 melanj, yon preparasyon anzim fwa sòti nan rat, ki repwodwi mamifè metabolis ak amelyore deteksyon an nan aktivite mutagèn.

Metodoloji nan tès la Ames

Pwosedi estanda nan tès la Ames enplike nan etap sa yo:

1. 1. Preparasyon pou tansyon tès: Salmonèl typhimurium tansyon ak pre - ki deja egziste mitasyon nan histidine sentèz jèn yo te itilize. Sa yo tansyon pa ka grandi san yo pa yon sous histidine ekstèn sòf si yon mitasyon ranvèse retabli fonksyon.
2. 2. Ekspozisyon nan n - nitrosamin: se kilti a bakteri melanje ak konpoze an tès (n - nitrosamin) sou yon plak agar minim ki gen yon ti kantite histidine.
3. 3. Aktivasyon metabolik (S9 melanj adisyon): Pou kont pou konvèsyon metabolik nan kò imen an, kèk echantiyon tès yo enkli fraksyon S9, yon ekstrè anzimatik soti nan mikrosom fwa rat.
4. 4. Enkubasyon ak kwasans: plak yo enkubasyon nan 37 ° C pou 48 èdtan, sa ki pèmèt koloni bakteri yo grandi si mitasyon rive ki retabli sentèz histidine.
5. 5. Koloni konte ak analiz: se nimewo a nan koloni revertant (bakteri ki avèg kapasite nan pwodwi histidine) konte ak konpare ak kontwole plak.
6. Entèpretasyon nan rezilta yo

• Tès pozitif Ames: Yon ogmantasyon siyifikatif nan koloni revertant konpare ak kontwòl la sijere konpoze an antren mitasyon, ki vle di pwopriyete mutagèn ak potansyèlman kanserojèn.
• Negatif Ames Tès: Si pa gen okenn ogmantasyon siyifikatif obsève, konpoze an gen anpil chans ki pa - mutagèn nan kondisyon tès yo.
• Dòz - Repons Relasyon: Pi wo dòz ki mennen ale nan ogmante pousantaj mitasyon ranfòse prèv la nan mutagenicity.

Konklizyon

Tès la Ames se yon rapid ak pri - metòd efikas pou evalye mutagenicity nan n - nitrosamin. Bay asosyasyon yo ak kansè nan, idantifye pwopriyete mutagèn yo atravè sa a épreuves se kritik pou kontwòl regilasyon ak evalyasyon risk. Tès sa a rete yon poto nan tès depistaj toksikolojik ak evalyasyon sekirite chimik.

Mo kle: N - Nitrosamin, NDSRIS, OECD 471, Enhanced Ames tès, amstè fwa S9, sitokrom P450 anzim, tès mitasyon