Ames próf fyrir N - nítrósamín: Mat á stökkbreytingu

Kynning á Ames prófinu

AMES prófið, einnig þekkt sem bakteríumástandi stökkbreytingarpróf, er mikið notað til líffræðilegrar prófunar sem metur stökkbreytandi möguleika efnasambanda, þar með talið N - nitrósamín. Þetta próf er þróað af Dr. Bruce Ames á áttunda áratugnum og notar sérstaka stofna af bakteríunni Salmonella typhimurium sem bera stökkbreytingar í genum sem taka þátt í myndun histidíns. Prófið ákvarðar hvort efni geti valdið stökkbreytingum í DNA baktería, sem gefur vísbendingu um hugsanlega krabbameinsvaldandi áhrif hjá mönnum.

Mikilvægi Ames prófsins fyrir n - nítrósamín

N - Nítrósamín eru þekkt fyrir eiturverkanir sínar og krabbameinsvaldandi eiginleika, þar sem þau geta framkallað DNA skemmdir með alkýleringu og oxunarálagi. Ames prófið er sérstaklega gagnlegt til að greina stökkbreytandi áhrif þeirra, þar sem mörg n - nítrósamín þurfa efnaskiptavirkjun með ensímbreytingum til að mynda mjög viðbrögð rafsækinna milliefna sem geta haft samskipti við DNA. Þessi virkjun kemur venjulega fram í lifur í gegnum cýtókróm P450 ensím. Til að endurtaka þessa efnaskiptabreytingu in vitro er prófið oft framkvæmt með og án efnaskipta virkjunar með því að nota S9 Mix, lifrarensímblöndur sem eru fengnar úr nagdýrum, sem líkja eftir umbrot spendýra og auka uppgötvun stökkbreytileika.

Aðferðafræði Ames prófsins

Hefðbundin aðferð við AME -prófið felur í sér eftirfarandi skref:

1. 1. Framleiðsla prófunarstofna: Salmonella typhimurium stofnar með fyrirliggjandi stökkbreytingum í histidínmyndun gena eru notaðir. Þessir stofnar geta ekki vaxið án ytri histidínuppsprettu nema öfug stökkbreyting endurheimti virka.
2. 2. V.
3. 3.
4. 4.
5. 5. Talning og greining nýlendu: Fjöldi órökstuddra þyrpinga (bakteríur sem náðu aftur getu til að framleiða histidín) er talinn og borinn saman við samanburðarplötur.
6. Túlkun niðurstaðna

• Jákvætt AME -próf: veruleg aukning á afturvirkum nýlendur samanborið við samanburðinn bendir til þess að efnasambandið örvar stökkbreytingar, sem felur í sér stökkbreytandi og hugsanlega krabbameinsvaldandi eiginleika.
• Neikvætt AMES próf: Ef engin marktæk aukning er vart er efnasambandið líklega ekki - stökkbreytandi við prófunarskilyrðin.
• Skammtur - Svarsamband: Hærri skammtar sem leiða til aukins stökkbreytingarhlutfalls styrkir vísbendingar um stökkbreytingu.

Niðurstaða

Ames prófið er hröð og kostnaður - Árangursrík aðferð til að meta stökkbreytingu n - nítrósamína. Í ljósi tengsla þeirra við krabbamein er það lykilatriði að bera kennsl á stökkbreytandi eiginleika þeirra með þessari prófun fyrir eftirlitseftirlit og áhættumat. Þetta próf er áfram hornsteinn við eiturefnafræðilega skimun og mat á efnaöryggi.

Lykilorð: N - Nítrósamín, NDSris, OECD 471, Auka Ames próf, hamstur lifur S9, cýtókróm P450 ensím, stökkbreytingarpróf