N -ニトロソアミンのAMESテスト：変異原性の評価

AMESテストの紹介

細菌逆逆変異試験としても知られるAMESテストは、N -ニトロソアミンを含む化合物の変異原性を評価する生物学的アッセイに広く使用されています。 1970年代にブルース・エイムズ博士によって開発されたこのテストでは、ヒスチジン合成に関与する遺伝子の変異を運ぶバクテリアサルモネラ・チチムリウムの特定の株を利用しています。このテストでは、物質が細菌DNAに変異を引き起こす可能性があるかどうかを決定し、ヒトの潜在的な発がん性を示しています。

N -ニトロソアミンのAMESテストの関連性

N -ニトロソアミンは、アルキル化と酸化ストレスを介してDNA損傷を誘発する可能性があるため、遺伝毒性および発がん性特性で知られています。 AMESテストは、多くのN -ニトロソアミンが酵素変換を介して代謝活性化を必要としてDNAと相互作用できる高度に反応性のある電気症中間メディエイトを形成するため、変異原性効果の検出に特に役立ちます。この活性化は通常、シトクロムP450酵素を介して肝臓で発生します。この代謝変換をin vitroで複製するために、このテストは、哺乳類の代謝を模倣し、変異原性活性の検出を促進するげっ歯類に由来する肝臓酵素製剤であるS9ミックスを使用して、代謝活性化の有無にかかわらず、しばしば実施されます。

AMESテストの方法論

AMESテストの標準手順には、次の手順が含まれます。

1. 1。試験株の調製：ヒスチジン合成遺伝子の既存の変異を持つサルモネラTyphimurium株が使用されます。逆変異が機能を回復しない限り、これらの株は外部ヒスチジン源なしでは成長できません。
2. 2。N-ニトロソアミンへの曝露：細菌培養は、少量のヒスチジンを含む最小限の寒天プレート上の試験化合物（N -ニトロソアミン）と混合されます。
3. 3。代謝活性化（S9混合添加）：人体の代謝変換を説明するために、一部のテストサンプルには、ラット肝臓ミクロソームからの酵素抽出物であるS9画分が含まれます。
4. 4.インキュベーションと成長：プレートは37°Cで48時間インキュベートされ、ヒスチジン合成を回復する変異が発生した場合に細菌コロニーが成長することができます。
5. 5。コロニーのカウントと分析：復帰コロニーの数（ヒスチジンを生成する能力を取り戻した細菌）がカウントされ、コントロールプレートと比較されます。
6. 結果の解釈

• 陽性AMESテスト：コントロールと比較した復帰コロニーの有意な増加は、化合物が変異を誘導することを示唆しており、変異原性および潜在的に発がん性の特性を暗示しています。
• 負のエイムテスト：有意な増加が観察されない場合、化合物はテスト条件下では非変異原性である可能性があります。
• 用量-反応関係：変異率の増加につながる高用量は、変異原性の証拠を強化します。

結論

AMESテストは、N -ニトロソミンの変異原性を評価するための迅速でコスト-効果的な方法です。がんとの関連を考えると、このアッセイを介して変異原性の特性を特定することは、調節制御とリスク評価に不可欠です。このテストは、毒物学的スクリーニングと化学的安全評価の基礎のままです。

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