ამეს ტესტი n - ნიტროზამინებისთვის: მუტაგენურობის შეფასება

შესავალი ამეს ტესტში

AMES ტესტი, რომელიც ასევე ცნობილია როგორც ბაქტერიული საპირისპირო მუტაციის ტესტი, ფართოდ გამოიყენება ბიოლოგიური გამოკვლევისთვის, რომელიც აფასებს ქიმიური ნაერთების მუტაგენურ პოტენციალს, მათ შორის N - ნიტროზამინებს. დოქტორ ბრიუს ამესმა 1970 -იან წლებში, ეს ტესტი იყენებს ბაქტერიის სალმონელას ტიფიმურიუმის სპეციფიკურ შტამებს, რომლებიც ახდენენ მუტაციებს ჰისტიდინის სინთეზში ჩართულ გენებში. ტესტი განსაზღვრავს, შეიძლება თუ არა ნივთიერებამ გამოიწვიოს ბაქტერიულ დნმ -ში მუტაცია, რაც უზრუნველყოფს ადამიანებში პოტენციური კანცეროგენურობის მითითებას.

AMES ტესტის აქტუალობა n - ნიტროზამინებისთვის

N - ნიტროზამინები ცნობილია მათი გენოტოქსიური და კანცეროგენული თვისებებით, რადგან მათ შეუძლიათ დნმ -ის დაზიანება გამოიწვიოს ალკილაციისა და ჟანგვითი სტრესის საშუალებით. AMES ტესტი განსაკუთრებით სასარგებლოა მათი მუტაგენური ეფექტების გამოსავლენად, რადგან მრავალი n - ნიტროზამინი მოითხოვს მეტაბოლურ გააქტიურებას ფერმენტული კონვერტაციის გზით, რათა ჩამოყალიბდეს უაღრესად რეაქტიული ელექტროფილური შუამავალი, რომელსაც შეუძლია დნმ -სთან ურთიერთობა. ეს გააქტიურება, როგორც წესი, ხდება ღვიძლში ციტოქრომ P450 ფერმენტების მეშვეობით. ამ მეტაბოლური კონვერტაციის in vitro განმეორების მიზნით, ტესტი ხშირად ტარდება მეტაბოლური გააქტიურების გარეშე და მის გარეშე S9 მიქსის გამოყენებით, ღვიძლის ფერმენტის მომზადება, რომელიც წარმოიქმნება მღრღნელებისგან, რაც ასახავს ძუძუმწოვრების მეტაბოლიზმს და აძლიერებს მუტაგენური მოქმედების გამოვლენას.

ამეს ტესტის მეთოდოლოგია

AMES ტესტის სტანდარტული პროცედურა მოიცავს შემდეგ ნაბიჯებს:

1. 1. ტესტის შტამების მომზადება: სალმონელას ტიფიმურიუმის შტამები გამოიყენება ჰისტიდინის სინთეზის გენებში არსებული მუტაციებით. ეს შტამები არ შეიძლება გაიზარდოს გარე ჰისტიდინის წყაროს გარეშე, თუ საპირისპირო მუტაცია არ აღადგენს ფუნქციას.
2. 2. N - nitrosamines- ის ზემოქმედება: ბაქტერიული კულტურა შერეულია ტესტის ნაერთთან (n - ნიტროზამინი) მინიმალურ აგარის ფირფიტაზე, რომელიც შეიცავს ჰისტიდინის მცირე რაოდენობას.
3. 3. მეტაბოლური გააქტიურება (S9 მიქსის დამატება): ადამიანის სხეულში მეტაბოლური კონვერტაციის გათვალისწინებით, ზოგიერთი ტესტის ნიმუში მოიცავს S9 ფრაქციას, ფერმენტულ ექსტრაქტს ვირთხის ღვიძლის მიკროზომიდან.
4. 4. ინკუბაცია და ზრდა: ფირფიტები ინკუბაცია ხდება 37 ° C ტემპერატურაზე 48 საათის განმავლობაში, რაც საშუალებას აძლევს ბაქტერიული კოლონიების ზრდას, თუ მოხდება მუტაცია, რომელიც აღადგენს ჰისტიდინის სინთეზს.
5. 5. კოლონიის დათვლა და ანალიზი: მოსახერხებელი კოლონიების რაოდენობა (ბაქტერიები, რომლებიც იბრუნებენ ჰისტიდინის წარმოების უნარს), ითვლიან და ადარებენ საკონტროლო ფირფიტებს.
6. შედეგების ინტერპრეტაცია

• პოზიტიური AMES ტესტი: კონტროლირებადი კოლონიების მნიშვნელოვანი ზრდა კონტროლთან შედარებით მიგვითითებს, რომ ნაერთი იწვევს მუტაციებს, რაც გულისხმობს მუტაგენურ და პოტენციურად კანცეროგენულ თვისებებს.
• უარყოფითი AMES ტესტი: თუ მნიშვნელოვანი ზრდა არ შეინიშნება, ნაერთი სავარაუდოდ არა - მუტაგენურია ტესტის პირობებში.
• დოზა - საპასუხო ურთიერთობა: უფრო მაღალი დოზები, რომლებიც იწვევს მუტაციის მაჩვენებლების ზრდას, აძლიერებს მუტაგენურობის მტკიცებულებებს.

დასკვნა

AMES ტესტი არის სწრაფი და ღირებულება - ეფექტური მეთოდი n - nitrosamines- ის მუტაგენურობის შესაფასებლად. იმის გათვალისწინებით, რომ მათი ასოცირება კიბოსთან, ამ გამოკვლევის საშუალებით მათი მუტაგენური თვისებების დადგენა გადამწყვეტი მნიშვნელობა აქვს მარეგულირებელი კონტროლისა და რისკების შეფასებისთვის. ეს ტესტი რჩება ქვაკუთხედი ტოქსიკოლოგიური სკრინინგის და ქიმიური უსაფრთხოების შეფასებისას.

საკვანძო სიტყვები: N - Nitrosamines, NDSRIS, OECD 471, გაძლიერებული AMES ტესტი, ზაზუნის ღვიძლის S9, ციტოქრომ P450 ფერმენტები, მუტაციის ტესტი